S6 kinase 信号通路

本研究基于网络药理学探究荷叶碱抑制人肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖的分子机制。采用MTT比色法、克隆形成实验检测荷叶碱对HuCCT1细胞增殖的影响；采用比色法、分光光度法检测荷叶碱对糖酵解生化指标的影响；通过网络构建和富集分析预测荷叶碱作用于肝内胆管癌的潜在靶点及通路，以此为基础探究荷叶碱影响HuCCT1细胞增殖的可能机制。结果表明荷叶碱能抑制HuCCT1增殖，显著降低细胞葡萄糖消耗及乳酸生成，并呈时间Imidazole ketone erastin生产商和剂量依赖性；网络药理学分析显示荷叶碱主要通过PI3K/Akt、MAPK、HIF-1信号通路影响肝内胆管癌生长、运动；聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)结果显示(30、60、120μmol/L)荷叶碱能降低低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶2(HK2)和丙酮酸激酶2(PKM2)的mRNA水平和蛋白表达，同时下调p-Akt~(Thr308)、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表达。综上，荷叶碱可能通过Panobinostat供应商影响Akt/mTOR/4EBP1信号级联调控的糖酵解standard cleaning and disinfection活性抑制HuCCT1细胞增殖。

彭静山教授分析、归纳了历代医家有关眼与脏腑、气血、经络等联系的论述，同时深受五轮学说、八廓学说的启发，总结出“眼Immune adjuvants(目)与脏腑经络相关”的理论根基和精髓，创立了眼针疗法。彭教授以传统的看眼察病作为基础，将眼球、眼眶区域分为八个区、十三个穴，每个穴位都有各自主治的眼科疾病，还能通过眼目与脏腑之间的辨证统一关系治疗所代表的脏腑经络发生的病症。眼针疗法主要治疗的SB203580试剂疾病有：干眼症、Graves眼病、糖尿病性前部缺血性视神经病变、假性近视、眼肌麻痹、青光眼及内科杂病等。目前，有关眼针疗法的治疗范围及方式方法没有明确且详细的标准，对于眼针selleck化学主治疾病的相关文献研究也比较少，对于不同的针具种类及行针手法的优劣、针刺深度的量化与疗效的相关性提及甚少，且研究报道中的样本量也多为小样本量，而动物模型的确立却未见相应的眼针实验。故眼针疗法今后的研究中，应重视实验研究，扩大样本量，加强眼针疗法不同的针具种类及行针手法的优劣、针刺深度的量化与疗效的相关性的研究。

目的 分析血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)在慢性肾小球肾炎患者尿液中的水平及相关性。方法 选取2019年3-5月该院收治的60例慢性肾小球肾炎患者为研究组，同期该院收治Alpelisib配制的高血压肾病患者60例为高血压肾病组，以及同期于该院门诊体检的60例健康者为对照组，采用生化分析仪检测患者血清标本中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)水平，采用酶联免疫吸附试验检测患者尿液中VEG获悉更多F、TGF-β1水平，比较3组VEGF、TGF-β1水平，对慢性肾小球肾炎发生的危险因素进行Logistic回归分析，分析VEGF、TGF-βImmuno-chromatographic test1的相关性及其对慢性肾小球肾炎的预测价值。结果 3组性别、年龄、体质量指数比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。研究组Scr、BUN、TG、VEGF、TGF-β1水平均高于高血压肾病组和对照组(P<0.05);研究组患者血管活性药物使用比例、机械通气比例、肾脏替代治疗比例、出院时Scr、最高序贯性器官功能衰竭评分(SOFA评分)、住院时间均高于高血压肾病组(P<0.05);Logistic回归分析显示，VEGF、TGF-β1、Scr、BUN、TG是慢性肾小球肾炎发生的危险因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线结果显示，VEGF、TGF-β1诊断慢性肾小球肾炎的曲线下面积(AUC)分别为0.776(95%CI:0.635～0.918,P=0.001)、0.725(95%CI:0.571～0.879,P=0.001),二者联合诊断的AUC为0.943(95%CI:0.851～0.999,P=0.001),联合诊断价值较高。结论 在慢性肾小球肾炎患者中，VEGF、TGF-β1水平较高，且VEGF、TGF-β1、Scr、BUN、TG是慢性肾小球肾炎发生的危险因素，VEGF、TGF-β1联合对慢性肾小球肾炎的诊断价值较高。

【目的】阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以学习记忆能力损害为特征的退行性神经系统疾病[1]。星形胶质细胞作为占比最多的胶质细胞,其不仅对神经元发挥营养支持作用[50],且通过参与神经元和突触的可塑性[53],对信息交流和整合发挥关键作用,其功能对大脑的学习和记忆过程具有重要的价值和意义[52]。而在AD的病程发展过程中,星形胶质细胞的形态和功能随着AD大脑环境的改变而发生改变[8]。运动通过调动身体机能的整合效应而实现预防和治疗作用[84],本研究以AD模型小鼠(APP/PS1)为研究对象,以运动干预为切入点,探索运动干预对AD模型小鼠学习和记忆能力的作用机制,在APP/PS1小鼠的病程早期启动持续运动干预,通过行为学比较运动干预对学习和记忆的作用,并检测星形胶质细胞反应性的变化情况,为AD的防治方法和AD的病理机制提供重要的理论依据。【方法】1.小鼠按照月龄和基因型随机分为6组:2M-WT、2M-AD、7M-WT、7M-AD、10M-WT、10M-AD,每组6只,正常饲养,不做任何干预,灌流后固定,行冰冻切片进行脑组织免疫荧光染色检测,包括海马和皮层胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和星形胶质细胞反应性表达的特异蛋白C3和s100A10表达量变化。2.小鼠按照基因型随机分为WT对照组、AD对照组及AD运动组,每组15只。AD运动组小鼠每天自主跑步1小时,从2月龄启动连续干预至7月龄,持续5个月。期间每个月采用背景恐惧记忆行为范式检测学习和记忆能力,在运动干预前的2月龄和运动干预结束后的7月龄分别进行旷场实验检测精神状态和运动能力。运动干预至7月龄并完成所有行为学检测后,灌流后固定,行冰冻切片进行脑组织免疫荧光染色检测,包括海马和皮层胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和星形胶质细胞反应性表达的特异蛋白C3和s100A10表达量变化。【结果】1.A1反应性星形胶质细胞在AD发生发展过程中的变化:1.1在AD大脑海马的变化:与2月龄AD小鼠相比,7和10月龄AD小鼠大脑海马CA1区A1反应性星形胶质细胞数量显著增多;10月龄AD小鼠CA1区A1反应性星形胶质细胞数量显著多于同月龄WT小鼠。与2月龄AD小鼠相比,7和10月龄AD小鼠大脑海马DG区A1反应性星形胶质细胞荧光值显著增高,数量无差异。1.2在AD大脑皮层的变化:与2月龄AD小鼠相比,7和10月龄AD小鼠大脑皮层A1反应性星形胶质细胞荧光值显著增高;7和10月龄AD小鼠大脑皮层A1反应性星形胶质细胞数量显著多于同月龄WT小鼠。2.A2反应性星形胶质细胞在AD发生发展过程中的变化:2.1在AD大脑海马的变化:与https://www.selleck.cn/products/AZD2281(Olaparib).html2月龄AD小鼠相比,7和10月龄AD小鼠大脑海马CA1和DG区A2反应性星形胶质细胞荧光值显著增多,数量无差异。2.2在AD大脑皮层的变化:相比2月龄阶段,AD小鼠7月龄大脑皮层A2反应性星形胶质细胞数量显著增多,10月龄大脑皮层A2反应性星形胶质细胞数量减少,但是显著多于2月龄;7和10月龄AD小鼠大脑皮层A2反应性星形胶质细胞数量显著多于同月龄WT小鼠。3.运动对海马和皮层A1反应性星形胶质细胞的影响:3.1运动对大脑海马A1反应性星形胶质细胞的影响:相比AD非运动组小鼠,AD运动组小鼠大脑海马CA1区A1反应性星形胶质细胞数量和荧光值显著减少;DG区A1反应性星形胶质细胞数量显著减少,荧光值无差异。3.2运动对大脑皮层A1反应性星形胶质细胞的影响:相rhizosphere microbiome比AD非运动组小鼠,AD运动组小鼠大脑皮层A1反应性星形胶质细胞数量显著减少,荧光值无差异。4.运动对海马和皮层A2反应性星形胶质细胞的影响:4.1运动对大脑海马A2反应性星形胶质细胞的影响:相比AD非运点击此处动组小鼠,AD运动组大脑海马CA1区A2反应性星形胶质细胞数量无差异,荧光值显著增高;DG区A2反应性星形胶质细胞数量显著减少,荧光值无差异。4.2运动对大脑皮层A2反应性星形胶质细胞的影响:相比AD非运动组小鼠,AD运动组小鼠大脑皮层A2反应性星形胶质细胞数量显著减少,荧光值无差异。5.运动改善AD小鼠的记忆损伤,是通过以下改变实现:5.1减少大脑皮层、海马CA1区和DG区的A1反应性星形胶质细胞数量。5.2减少大脑海马CA1区A1反应性星形胶质细胞荧光值。5.3减少大脑皮层和海马DG区的A2反应性星形胶质细胞数量实现。5.4增高大脑海马CA1区A2反应性星形胶质细胞荧光值。【结论】1.在AD小鼠病程中星形胶质细胞的反应性增强。2.早期运动干预通过改变星形胶质细胞的反应性,改变记忆损伤。

1目的1.1采用Cite Space 6.1.R6软件,以中国知网发表的文献数据为研究对象,对国内中医药治疗Wilson病研究领域进行可视化分析,绘制中医药治疗Wilson病研究图谱,通过可视化方式展现中医药治疗Wilson病的研究现状、热点及未来研究趋势,为Wilson病中医药领域的发展提供研究思路上的参考。1.2通过观察肝豆扶木汤联合西医治疗痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤患者的临床疗效及早期肾损伤指标变化,进而探讨肝豆扶木汤治疗痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤的有效性及安全性,为中医药治疗痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤提供有效的临床依据。2方法2.1中医药治疗Wilson病的知识图谱分析通过对中国知网数据库进行检索,检索出国内公开发表的所有关于中医药治疗Wilson病的文献。制定明确的纳入标准、排除标准,对检索出的所有文献进行筛选。阅读所有纳入的文献,完成数据整理工作,并对文献数据进行规范化处理。使用科学计量学的方法,采用可视化软件Cite Space 6.1.R6,通过文献聚类分析、关键词共现分析等技术构建中医药治疗Wilson病的知识图谱。2.2肝豆扶木汤对痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤临床干预研究2.2.1从2021年10月至2022年10月就诊安徽中医药大学第一附属医院脑病中心Wilson病患者中,选取契合标准的痰瘀互结型Wilson病患者60例,随机分组为治疗组和对照组,并收集30例同期来自安徽中医药大学第一附属医院体检中心健康体检者作为健康体检组。治疗上,对照组予低铜高蛋白饮食,予二巯丙磺钠注射液驱铜治疗(驱铜治疗6天后间歇2天,8天为1疗程),予葡萄糖酸钙注射液补钙治疗(间歇期补钙,疗程第7天、第8天),予注射用谷胱甘肽保肝治疗(保肝治疗持续整个疗程,不间断),共治疗4个疗程。治疗组在对照组治疗的基础上,给予肝豆扶木汤口服。2.2.2采用尿视黄醇结合蛋白、尿α1微球蛋白、尿β2微球蛋白、尿免疫球蛋白G、尿转铁蛋白、尿微量白蛋白、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、血清胱抑素C、尿白蛋白/肌酐比值评价早期肾损伤程度。通过中医证候积分、统一肝豆状核变性评分量表Ⅲ、24h尿铜等指标评价痰瘀互结型Wilson病患者临床疗效。分析比较痰https://www.selleck.cn/products/gw4869.html瘀互结型Wilson病患者与健康体检者早期肾损伤指标;观察肝豆扶木汤对痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤患者临床疗效及早期肾损伤指标的影响。3结果3.1中医药治疗Wilson病的知识图谱分析最终纳入文献308篇,绘制知识图谱6幅。从发文量上看,虽然总数较少,但整体呈上升趋势,显示Wilson病中医药领域的研究前景广阔。从合作关系上看,主要以安徽中医药大学及其附属医院为代表研究团体,但缺乏跨机构、跨区域合作。从研究热点上看,痰瘀互结证、湿热内蕴证为临床常见的中医证型,也是Wilson病中医证型研究的热点;肝豆扶木汤、肝豆汤、肝豆灵等是临床疗效较为确切的中药复方,研究也相对丰富;肝纤维化、脾功能亢进、认知障碍及精神症状的探讨成为临床研究的重点;数据挖掘也成为近几年来新兴的研究方向。3.2肝豆扶木汤对痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤临床干预研究3.2.1痰瘀互结型Wilson病患者与健康体检者早期肾损伤指标比较痰瘀互结型Wilson病患者早期肾脏损伤指标尿视黄醇结合蛋白、尿α1微球蛋白、尿β2微球蛋白、尿免疫球蛋白G、尿转铁蛋白、尿微量白蛋白、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、血清胱抑素C以及尿白蛋白/肌酐比均明显高于健康体检者(P<0.01)。3.2.2临床总疗效比较分析肝豆扶木汤组总有效率为93.33%,西医治疗组总有效率为66.67%,两组临床总有效率比较有统计学意义(P<0.05)。3.2.3中医证候积分比较分析经过4个疗程排铜结束后,两组中医证候总积分值均较前明显降低(P<0.01),且肝豆扶木汤组中医证候总积分值较西医治疗组降低更显著(P<0.01)。3.2.4统一肝豆状核变性评GSK1120212采购分量表Ⅲ积分比较分析经过4个疗程排铜结束后,两组统一肝豆状核变性评分量表Ⅲ积分均较前明显降低(P<0.01),且肝豆扶木汤组统一肝豆状核变性评分量表Ⅲ积分较西医治疗组降低更显著(P<0.01)。3.2.5早期肾损伤指标比较分析经过4个疗程排铜结束后,肝豆扶木汤组与西医治疗组早期肾损伤指标尿视黄醇结合蛋白、尿α1微球蛋白、尿β2微球蛋白、尿免疫球蛋白G、尿转铁蛋白、尿微量白蛋白、血清胱抑素C、尿白蛋白/肌酐比值均较治疗前明显降低(P<0.01),且肝豆扶木汤endophytic microbiome组较西医治疗组降低更明显(P<0.01);早期肾损伤指标尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶较治疗前降低不明显(P>0.05),且肝豆扶木汤组与西医治疗组比较无统计学意义(P>0.05)。3.2.6 24h尿铜比较分析经过2个疗程排铜结束后,肝豆扶木汤组与西医治疗组24h尿铜较治疗前均显著增加(P<0.01),且肝豆扶木汤组较西医治疗组24h尿铜增加更明显(P<0.01)。经过4个疗程排铜结束后,肝豆扶木汤组与西医治疗组24h尿铜较治疗前均增加(P<0.01),且肝豆扶木汤组较西医治疗组24h尿铜增加更明显(P<0.01)。3.2.7安全性指标比较分析经过4个疗程排铜结束后,肝豆扶木汤组白细胞、红细胞、血小板值与治疗前相比稍降低,无统计学差异(P>0.05),西医治疗组白细胞、红细胞、血小板值较治疗前降低明显,有统计学意义(P<0.05);肝豆扶木汤组谷丙转氨酶、谷草转氨酶值与治疗前相比显著降低(P<0.05),西医治疗组谷丙转氨酶、谷草转氨酶值稍降低,但不具统计学意义(P>0.05);肝豆扶木汤组和西医治疗组血尿素氮与血肌酐值均稍有降低,但无统计学意义(P>0.05)。3.2.8不良反应比较分析经过4个疗程排铜结束后,肝豆扶木汤组不良反应发生率为6.67%,西医治疗组不良反应发生率为26.67%,两组比较有统计学意义(P<0.05)。4结论4.1中医药治疗Wilson病的知识图谱分析4.1.1中医药治疗Wilson病领域总体研究数量呈波动增长态势。4.1.2安徽中医药大学及其附属医院在中医药治疗Wilson病领域表现活跃,合作紧密。4.1.3中医药治疗Wilson病领域研究主要集中在临床用药研究、中医辨证论治及基础理论研究以及临床症状及病理机制研究3个方面。4.1.4数据挖掘成为近几年新兴的研究热点方向。4.2肝豆扶木汤对痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤临床干预研究4.2.1痰瘀互结型Wilson病患者存在一定程度的早期肾损伤。4.2.2肝豆扶木汤联合西医治疗能有效提高痰瘀互结型Wilson病临床总有效率。4.2.3肝豆扶木汤联合西医治疗痰瘀互结型Wilson病患者能有效增加24h尿铜排泄、降低中医证候积分及统一肝豆状核变性评分量表Ⅲ积分、改善患者临床症状,且优于单纯使用西医治疗。4.2.4肝豆扶木汤联合西医治疗可改善痰瘀互结型Wilson病早期肾损伤的相关指标,且优于单纯使用西医治疗。4.2.5肝豆扶木汤临床使用过程中不良反应较少,安全性好。

目的:1.基于数据挖掘技术,探讨李小娟教授治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的用药规律,得出核心药物及聚类处方,总结临床经验。2.利用网络药理学的研究方法,探讨核心药物治疗糖尿病肾病的潜在作用机制。材料与方法:1.收集从2020年9月至2022年9月近2年就诊于辽宁中医药大学附属医院李小娟教授门诊及辽宁中医康复中心住院部的患者,筛选出明确诊断为DKDⅢ期且符合纳入标准的患者的病例资料,运用Excel软件对临床病例的数据进行登记,对excel数据库中的信息进行归纳分析,对中药使用的频次、药味数、性味归经和中药功效进行分析,运用SPSS22.0软件进行聚类组方分析,归纳总结李师治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的用药规律。2.运用网络药理学的研究方法,将使用频次≥50次的药物在TCMSP数据库中搜索并筛选药物作用靶点,同时在NVP-TNKS656溶解度OMIM、Gene Cards、TTD和Drugbank数据库中搜索疾病靶点,将药物靶点与疾病靶点在venny平台上取交集,利用Cytoscape3.9.1软件中构建“药物-成分-靶点”网络图,运用String数据库构建neuro-immune interactionPPI网络图,将网络图信息导入到Metascape数据库中进行GO和KEGG通路富集分析。结果:1.本研究共收集2型糖尿病肾病Ⅲ期患者126例,其中,男性76例,占比60.3%,女性50例,占比39.7%。男女比例1.52:1。126例患者中年龄最小者27岁,最大者83岁,占比最高年龄段为:“56-65”岁,占比为34.9%,为高发年龄段。本研究共涉及188种药,分析TGF-beta/Smad抑制剂处方药味数,结果显示药味数在8-19,以12-16味药的处方为主。其中药物使用频次排名前10的药物依次为山茱萸、菟丝子、黄芪、三七、益母草、黄柏、知母、生地黄、黄连、丹参。其中以寒性药、甘味药和归肝、肾、脾经的药物使用最多。药物功效的统计结果中,补虚药使用频次最多。聚类分析得出5个聚类新方。2.核心药物筛选后获得75个药物有效成分,281个作用靶点,与疾病靶点取交集后得到150个交集靶点,核心药物通过槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、豆甾醇、异鼠李素、薯蓣皂苷元、黄连素等活性成分,调节TNF、IL6、IL1B、AKT1、VEGFA、GAPDH等基因靶点,通过AGE-RAGE、TNF、IL-17和MAPK等信号通路发挥降低炎症反应,减轻肾脏损伤,保护肾功能等作用。本研究展示出核心药物是多成分、多靶点、多通路共同参与治疗DKD。结论:1.2型糖尿病肾病Ⅲ期患者病位在肾,涉及肝脾,以脾肾亏虚为主,瘀血阻于肾络。李师在治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期患者用药上,以寒性药为主,甘味药使用最多,甘寒养阴,甘味补气,以归肝、肾和脾经为主,补虚药占比最大。治疗上补益脾肾,活血化瘀。2.核心药物通过槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、豆甾醇等活性成分,通过AGE-RAGE、TNF、IL-17和MAPK等信号通路发挥降低炎症反应、减轻肾脏损伤、保护肾功能等作用。

将“肺虚络瘀”病机观为作为慢性阻塞性肺疾病（COPD）Compound 3化学结构发病的核心理论指导探讨其与氧化应激的相关性，结合对COPD机制的现代临床研究与实验研究，对COPD病理改变过程中出现的氧化应激进行分析与探讨，认为氧化应激是COPD的重要病机之一；从肺虚对机体氧化-抗氧化平衡调节失调，提出COPD氧化-抗氧化失衡是肺虚的微观病理表现基础；氧化应激及其产生的病理改变与“肺虚络瘀”具有相同的病机改变表现；通补肺络法通过调节机Orthopedic biomaterials体的氧化-抗氧化水平，减轻氧化应激，延缓COPD进程，从这三方面深入探究COPD的肺虚络瘀病机理论与氧化selleck应激的相关性，全面阐释COPD“肺虚络瘀”病机观的科学内涵，并从分子机制水平上诠释从肺络论治COPD的作用机制与靶点，为COPD的中医药治疗与其治疗机制研究提供新的思路及科学依据。

目的 探究慢性肾小球肾炎采用益肾清利活血汤治疗的临床效果。selleck Smoothened Agonist方法 104例慢性肾小球肾炎患者,通过挂号编号的单双数分为对照组和观察组,各52例。两组患者均采用GSK1349572小鼠常规方式治疗,在此基础上,对照组使用肾炎康复片联合百令胶囊进行治疗,观察组使用益肾清利活血汤治疗。对比两组患者的临床疗效、临床指标(血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白定量)及不良反应发生情况。结果 观察组总有效率为96.15%,高于对照组的78.85%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组血尿素氮(6.79±1.06)mmol/L、血肌酐(97.58±5.26)μmol/L和24 h尿蛋白定量(0.48±0.42)g/2probiotic persistence4 h均明显低于对照组的(10.84±1.77)mmol/L、(128.94±5.88)μmol/L、(0.86±0.53)g/24 h,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者均未发生不良反应。结论 应用益肾清利活血汤治疗慢性肾小球肾炎能够明显提升疗效,更快速改善患者的肾功能,建议临床推荐。

目的:多体www.selleck.cn/products/Methazolastone素氢质子磁共振波谱(~1H magnetic resonance spectroscopy,~1H-MRS)联合三维动脉自旋标记(3D arterial spin labeling,3D-ASL)定量评估无明显神经精神症状的系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者脑代谢物及脑血流量,探讨二者之间的相关性及其与认知功能的相关性。方法:本研究为前瞻性、横断面研究,于2022年1月至2022年11月募集19例无明显神经精神症状的女性SLE患者(SLE组)和14例年龄匹配的女性健康志愿者(对照组),对每个研究对象行头颅常规MRI、3D-ASL、多体素~1H-MRS扫描及神经心理学量表检查,包括蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、焦虑自评量表(self-rating anxiety scale,SAS)和抑郁自评量表(self-rating depression scale,SDS),测量双侧半卵圆中心(sGSKJ4核磁emioval center,SOC)、豆状核(lentiform nucleus,LN)及背侧丘脑(dorsal thalamus,DT)平均脑血流量(cerebral blood flow,CBF)和脑代谢物浓度比值,包括N-乙酰天冬氨酸(NAA)/肌酸(Cr)、胆碱(Cho)/NAA和Cho/Cr,采用两独立样本t检验比较2组受试者各脑区代谢物浓度比值及平均CBF值的差异,采用Pearson相关分析探讨有明显差异脑区的代谢物浓度比值与其平均CBF值的相关性,并分析二者与患者认知功能的相关性。结果:(1)SLE组MoCA得分低于对照组(P=0.001),而两组之间SAS和SDS的分值差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与对照组相比,SLE组双侧SOC、LN、DT的平均CBF值降低(P均<0.05)。(3)SLE组双侧SOC及右DT NAA/Cr值低于对照组(P均<0.05),与对照组相比,SLE组其余脑区NAA/Cr有降低的趋势,但差异无统Antibody Services计学意义(P>0.05);SLE组左侧SOC Cho/Cr高于对照组(P<0.05),其余脑区Cho/Cr有升高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);SLE组双侧SOC、LN及DT Cho/NAA高于对照组(P均<0.05)。(4)患者组MoCA分值与双侧SOC NAA/Cr值呈正相关(右侧r=0.471,P=0.042;左侧r=0.476,P=0.040)。右LN Cho/NAA值与其平均CBF值呈负相关(r=-0.639,P=0.003),右DT Cho/NAA值与其平均CBF值呈负相关(r=-0.547,P=0.015)。结论:无明显神经精神症状的SLE患者正常外观脑组织存在脑代谢及脑血流灌注的异常,并提示其与患者的认知功能减退有关,多模式磁共振研究有助于从不同角度了解SLE患者脑损害的病理机制,并有助于发现不同病理机制之间的相关性。

目的:在法医检案中经常遇到争吵、寒冷、轻微外伤等应激因素刺激后快速死亡的案例,部分经系统尸检无明显致死性的疾病或损伤,死亡原因常鉴定为死因不明或心源性猝死,此类案件因缺乏较为特异的病理形态学诊断指标致使鉴定意见有争议,往往启动多次重新鉴定,使案件久拖不决,造成不良社会影响。冠状动脉痉挛(Coronary artery spasm,CAS)是指局部或弥漫性冠状动脉对各类刺激的可逆性过度收缩反应,使正常或粥样硬化的冠状动脉部分或全部阻塞,可导致心肌缺血、心肌梗死甚至猝死,提示其可能是导致无明显心脏疾患心性死亡的重要机制之一;CAS亦可引起冠心病患者急性心律失常导致死亡;轻微外伤等应激因素是否通过引起CAS导致快速死亡有待证实;因此揭示CAS致死的病理分子机制是法医病理学亟待解决的科学技术问题。研究已证实血管平滑肌细胞的收缩高反应性是CAS引起血管过度收缩的主要机制。肌球蛋白轻链2(Myosin II regulatory light chain,MLC2)磷酸化是局部血管平滑肌收缩反应的关键。平滑肌收缩效率取决于收缩蛋白对钙的敏感性,PKC加强的磷酸酶抑制剂17(Protein Kinase CPotentiated Phosphatase Inhibitor 17,CPI-17)是调节钙敏感性的重要分子。CPIgenetic test-17最初被确认为PKC磷酸化底物,随后发现Rho激酶、蛋白激酶N(Proteinkinase N,PKN)、整合素连接激酶(Integrin-Linked Kinase,ILK)等也可磷酸化CPI-17。提示CPI-17极可能是细胞内多种激酶调节肌球蛋白轻链磷酸酶(Myosin light chain phosphatase,MLCP)诱导CAS的共同关键枢纽。PKC通过调节下游信号在血管收缩中起着至关重要的作用,如内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)、CPI-17等。然而,目前尚不清楚PKC是否调节CPI-17/MLC2信号通路在CAS中发挥作用。因此本项目拟从整体动物水平、细胞水平,建立痉挛损伤模型,研究PKC/CPI-17/MLC2通路诱导CAS的作用机制,探讨该通路在冠状动脉痉挛发生中关键因子的变化。筛选可靠的CAS标记物为临床和法医学鉴定提供新思路。方法:1.整体水平研究:(1)建立冠状动脉痉挛大鼠模型。(2)实验分组为Control组和CAS组。(3)应用HE染色观察冠状动脉内弹力膜折叠程度、冠状动脉平滑肌收缩带变化。(4)采用透射电镜观察心肌的超微结构变化。(5)采用上机生化检测心肌酶水平。(6)采用Western blot法、免疫组织化学染色法和免疫组织荧光化学染色法检测PKC/CPI-17/MLC2通路相关蛋白p-CPI-17(Thr38)、CPI-17、p-MLC2(Ser19)、MLC表达情况。2.细胞水平研究:(1)体外培养人冠状动脉平滑肌细胞(h CASMCs),将血管收缩剂(血管紧张素,Ang II)以不同的剂量(0、0.05、0.1、0.5、0.1 u M/m L)或不同的时间(0、5、15、30、60 min)添加到培养液,采用Docetaxel免疫细胞荧光化学染色观察p-MLC2(Ser19)表达变化,以选择使细胞收缩的最佳Ang II浓度和时间。(2)实验分组为Veh组,Calphostin C组,GF-109203X组,Ang II组,Ang II+GF-109203X组and Ang II+Calphostin C组。(3)经免疫细胞荧光染色法检测PKC/CPI-17/MLC2通路相关蛋白PKCα、PKCδ、PKCε、p-CPI-17(Thr38)、CPI-17、p-MLC2(Ser19)、MLC表达情况。(4)加入PKC抑制剂(GF-109203X,5μmol/L;Calphostin C,3μmol/L)与对照组h CASMCs同等条件下培养相同时间后,激光共聚焦免疫荧光技术观察各组细胞内肌丝排列改变,用免疫细胞荧光染色法检测PKCα、PKCδ、PKCε、p-CPI-17(Thr38)、CPI-17、p-MLC2(Ser19)、MLC表达变化。结果:1.整体水平研究结果(1)HE染色结果表明:与对照组大鼠冠状动脉相比,CAS组大鼠冠脉平滑肌细胞空泡变,冠脉内膜折叠度增加。(2)透射电镜结果表明:与对照组大鼠心肌相比,CAS组心肌细胞线粒体肿胀,膜破损,基质部分变浅、溶解,嵴断裂、变短;肌浆网明显扩张,空泡变。(3)心肌酶检测结果表明:与对照组相比,尾静脉注射垂体后叶素2 min组CAS大鼠血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH1)没有明显差异;尾静脉注射垂体后叶素10 min和30 min组CAS大鼠血清中CK、CK-MB、LDH、LDH1水平升高。(4)免疫组织化学染色、免疫组织荧光化学染色和Western blot检测结果显示:与对照组相比,CAS组冠状动脉中p-CPI-17(Thr38)和pMLC2(Ser19)磷酸化水平升高。2.细胞水平研究结果(1)体外培养h CASMCs,细胞免疫荧光染色方法检测平滑肌细胞的标志性蛋白(a-SMA)表达情况。该细胞系基本具备原代培养的冠状动脉平滑肌细胞的形态学、表型及各项功能特点。(2)免疫细胞荧光化学染色结果显示:在Ang II处理期间,h CASMCs显示MLC2的磷酸化水平的增加,其在剂量为0.1μM/ml,处理时间为30min时达到最高水平,因此选择0.1μM/ml Ang II作用30 min时进行后续实验。(3)免疫细胞荧光化学染色结果显示:与对照组相比,Ang II组PKCα从h CASMCs细胞质转位至细胞膜上,而PKCδ和PKCε表达在细胞质中,与对照组相比无明显差异。(4)免疫细胞荧光化学染色结果显示:Veh组、Calphostin C组、GF-109203X和Ang II+Calphostin C组的PKCα主要位于细胞质中,Ang II组和Ang II+GF-109203X组的PKCα从细胞质转位至细胞膜上。(5)免疫细胞荧光化学染色结果显示:与Veh组相比,Calphostin C组和GF-109203X组p-CPI-17(Thr38)和p-MLCD-Lin-MC3-DMA molecular weight2(Ser19)蛋白阳性表达无显著差异;与Veh组相比,Ang II组p-CPI-17(Thr38)和p-MLC2(Ser19)蛋白阳性表达明显增高;与Ang II组相比,Ang II+GF-109203X组和Ang II+Calphostin C组p-CPI-17(Thr38)和p-MLC2(Ser19)蛋白阳性表达降低。结论:在整体水平研究中,冠状动脉痉挛组大鼠的冠状动脉中p-CPI-17(Thr38)、p-MLC2(Ser19)升高;在细胞水平研究中,Ang II组的h CASMCs中PKC-α发生移位,并且h CASMCs中p-CPI-17(Thr38)、pMLC2(Ser19)升高,提示PKC/CPI-17信号通路参与冠状动脉痉挛的发生;p-CPI-17(Thr38)、p-MLC2(Ser19)可能作为诊断死前CAS的分子标记物。