S6 kinase 信号通路

背景:庆大霉素(GEN)是一种氨基糖苷类抗生素,在临床上对革兰氏阴性菌引起的感染十分有效。尽管GEN在治疗各种细菌感染方面具有重要作用,但其在使用过程中具有十分严重的肾毒性和耳毒性,目前还没有被批准的针对肾毒性的有效措施。在近些年的许多研究中发现,GEN造成的肾脏损伤过程中存在着多种细胞死亡方式,如细胞坏死、细胞凋亡等,而其主导的死亡方式尚且没有定论。目前在GEN毒性机制的大量研究中发现细胞内氧化/抗氧化失衡、钙离子干扰、钙激活蛋白酶活化等与GEN的毒性密切相关。在本研究中,绿茶中的一种有效抗氧化成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EG)被用于减弱GEN造成的肾毒性。并且探讨EG抑制GEN造成的肾脏损伤的主要机制,为GEN的临床安全使用提供保障。方法:在体内实验中,选用SD大鼠作为模型对象,使用GEN以及EG分为四组进行造模:正常对照组;EG组;GEN组;GEN+EG组,首先检测了各组血肌酐、尿素氮水平变化情况,对各组SD大鼠肾脏Hepatitis management功能进行评估;其次通过对各组SD大鼠肾脏组织切片进行病理染色,同时通过透射电镜观察各组SD大鼠肾脏损伤程度以及超微结构变化等,来判断GEN造成肾脏损伤的具体细胞死亡方式以及EG对其的保护作用;最后,检测各组SD大鼠肾脏组织中抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)、过氧化物质丙二醛(MDA)以及细胞凋亡、铁死亡标志蛋白水平变化。在体selleck HPLC外实验中,使用GEN对大鼠肾脏细胞52E(NRK-52E)和人肾小管上皮细胞(HK-2)进行造模。检测各组细胞活力变化以及氧化/抗氧化物质水平变化情况。使用GEN刺激NRK-52E细胞,观察细胞中活性氧(ROS)水平随时间变化情况。在蛋白水平检测各组细胞相关指标变化情况。同时,使用小干扰RNA敲低抗氧化蛋白核因子红系2相关因子2(Nrf2)水平,检测氧化/抗氧化物质水平变化,以及细胞凋亡铁死亡标志蛋白水平变化情况。利用分子对接热位移技术对EG抑制GEN造成的肾损伤的具体机制进行研究。最后,利用体外最小抑菌浓度(MIC)试验和抑菌环实验来验证EG对于GEN的抗菌作用是否有影响。结果:体外使用二氢乙啶(DHE)染色实验检测GEN刺激后NRK-52E细胞内ROS含量变化,结果显示GEN刺激早期就可诱导细胞内ROS大量积累,并在1.5H至24H内持续处于较高水平。体内体外检测发现GEN可降低抗氧化物质GSH水平,而EG的使用能够逆转这一现象。而EG能够使GEN造成的过氧化物质MDA水平升高。检测细胞凋亡标志性蛋白Caspase3/C-caspase3、铁死亡标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)与SLC7A11水平,发现EG能获悉更多够逆转GEN导致的细胞凋亡与铁死亡。同时,检测抗氧化蛋白Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)水平,发现EG能够激活Nrf2/HO-1通路并逆转GEN导致的抗氧化蛋白Nrf2/HO-1水平的下降。而在利用小干扰RNA敲低Nrf2水平后,EG丧失了保护GEN造成的肾脏损伤的作用。分子对接与热位移的结果证实EG能够与Nrf2竞争性结合kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1),激活Nrf2蛋白。最后,体外最小抑菌浓度(MIC)试验和抑菌环实验表明,EG对于GEN的抗菌效果没有影响。结论:在本研究中,我们证明GEN刺激后,细胞中ROS含量迅速增加,并很快处于异常且稳定的水平。氧化与抗氧化水平的失衡在GEN造成的肾损伤中起到关键性的作用,而抗氧化物质EG的使用能够通过抑制细胞凋亡、铁死亡来保护GEN造成的肾脏损伤。同时研究证明,EG的保护作用是通过激活Nrf2/HO-1通路发挥作用的。并且EG对于GEN的抗菌效果并无影响。

目的:腰椎间盘退变(lumbar intervertebral disc degeneration,LIDD)是临床腰痛主要病因,寻求LIDD的预防及治疗方法具有重大意义。本研究旨在明确1,25(OH)_2D_3在缓解LIDD过程中的作用,并探讨1,25(OH)_2D_3通过抑制腰椎间盘退变髓核细胞(nucleus pulposus Cells,NPCs)铁死亡从而抑制LIDD的机制。方法:培养NPCs细胞,采用不同浓度1,25(OH)_2D_3按不同时间处理NPCs寻找最佳作用浓度和时间,应用铁死亡激动剂Erastin诱导NPCs发生铁死亡。采用Cell Counting Kit-8(CCK8)检测NPCs活力,采用实时定量聚合selleck FUT-175酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和免疫蛋白印迹法(western blot,WB)检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)的m RNA和蛋白水平。采用RT-qPCR检测SLC7A11和SLC40A1的m RNA表达水平。采用流式细胞术检测细胞内脂质活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,生化试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,通过电镜观察NPCs的线粒体形态变化。结果:1,25(OHTriterpenoids biosynthesis)_2D_3促进NPCs增殖的最佳浓度为10nmol/L,最佳时间Ferroptosis抑制剂为48h。采用10nmol/L 1,25(OH)_2D_3预处理NPCs 48h后再加入Erastin处理,细胞形态和生长状况较Erastin组明显好转,NPCs内GPX4、SLC7A11和SLC40A1的表达、以及SOD、GSH的水平均显著升高,而细胞内ROS和MDA水平显著下降。与空白对照相比,1,25(OH)_2D_3组NPCs内VDR表达明显增多,Erastin组VDR表达明显被抑制,经1,25(OH)_2D_3预处理后部分逆转了VDR表达。在VDR基因沉默后,1,25(OH)_2D_3对Erastin诱导NPCs铁死亡的抑制能力减弱。结论:1,25(OH)_2D_3通过与VDR结合抑制腰椎间盘退变NPCs铁死亡从而抑制LIDD。

目的:构建一种乏氧响应的PLX4032价格纳米载体用于结直肠癌的治疗,联合米托蒽醌和柳氮磺吡啶,考察体外诱导铁死亡和免疫原性死亡的能力,以及体外促进DC细胞和CD8+T细胞的活化的情况;同时体内检测肿瘤渗透深度和联合免疫治疗在结直肠癌上的治疗效果并探索免疫治疗和铁死亡的相关机制,为未来的临床结直肠癌的治疗提供一种新的策略。方法:1.将PEG、多巴胺(Dopamine)和偶氮苯-4,4-二羧酸(Azobenzene-4,4′-dicarboxylic acid,AZO)通过酰胺反应获得乏氧敏感的PEG多巴胺衍生物PAD,以及合成无敏感键的对照组PD,通过核磁共振氢谱验证化合物的合成成功;随后将PD和PAD分别与不同比例的铁、米托蒽醌(MTO)和柳氮磺吡啶(SAS)配位反应获得乏氧响应材料PAD@MS及其对照组PD@MS;通过相关实验对所获得的纳米材料的理化特性进行表征,包括水合粒径、电位、透射电镜、药物释放,材料稳定性等。2.在细胞层面上进行验证,分别在常氧和乏氧的情况下测量不同分组在细胞中的摄取、药物毒性、ROS水平,以及铁死亡的一些表征,包括MDA、GSH、NADPH的含量,SLC7A11、PTGS2、FTL1的蛋白表达,添加各类死亡抑制剂的细胞毒性试验和通过透射电镜反应细胞线粒体的形貌。3.检测在常氧和乏氧下不同处理组细胞中损伤相关分子模式(DAMPs)相关指标,包括CRT、HMGB1、ATP,从而验证其诱导肿瘤免疫原性死亡的能力;通过流式检测DC的活化成熟情况,评估不同分组对DC的激活能力,体外检测不同处理后的DC细胞对CD8+T细胞的活化能力。4.在动物水平通过小鼠活体成像仪检测游离药物、材料PD@MS和PAD@MS在小鼠体内不同时间点的分布情况,通过大鼠眼眶取血检测不同对间点药物在大鼠体内代谢情况,并在C57BL/6和BALB/c小鼠上监测MC38和CT26结直肠癌皮下瘤治疗疗效。存在C57BL/6小鼠上建立结直肠癌肝转移原位模型,并通过治疗观察疗效。5.检测治疗后体内淋巴结、血液、肿瘤中相关免疫细胞如CD4+T、CD8+T、Treg、巨噬细胞、DC细胞的数量水平变化,体内实验中小鼠肿瘤内铁死亡相关指标的水平,以及用ELISA检测体内IFN-γ和immediate range of motionTNF-α的分泌情况。结果:1.核磁共振氢谱结果显示化合物合成成功;测得PD@MS和PAD@MS的水合粒径大概为～130nm,电位～-15mv,PDI～0.2;在常温下有着良好的稳定性。用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)模拟乏氧环境,测得材料在乏氧的时候有着更快的药物释放,并且透射电镜也证明了材料在乏氧的时候材料分解的更快这一特性。2.在常氧的情况下,细胞对游离药物M+S的摄取相比于材料组PD@MS和PAD@MS明显增高,考虑是PEG的存在会影响细胞的摄取,在乏氧的时候PAD@MS的摄取明显高于PD@MS,考虑是乏氧的时候乏氧键的断裂使得PEG的脱落,从而减少了抑制摄取的影响。PAD@MS在乏氧条件下有着较高的细胞摄取,可抑制MC38细胞和CT26细胞的增殖,其抗肿瘤作用主要与其成分MTO和SAS有关,Fe3+和MTO可通过增加ROS的产生,SAS可通过抑制GSH的合成,从而引起细胞内氧化还原失衡导致细胞死亡。PAD@MS可通过引起肿瘤细胞发生铁死亡来杀伤肿瘤,可降低细胞膜表面SLC7A11的表达、增加细胞内ROS的产生,降低细胞内GSH和NADPH的含量,从而引起氧化还原失衡,引起脂质过氧化物MDA和蛋白PTGS2表达增高;同时细胞线粒体电镜也有着线粒体膜密度增高,外膜断裂,内膜消失等铁死亡特征。添加各种死亡抑制剂的细胞毒性实验结果显示PAD@MS引起的细胞死亡可被铁死亡抑制剂在一定程度上的逆转,证明PAD@MS可通过引起肿瘤细胞发生铁死亡。肿瘤细胞发生免疫原性死亡的时候会释放点击此处一些免疫原性物质,如CRT、HMGB1、ATP等,这些物质可用来诱导DC细胞的活化成熟。实验结果表明PAD@MS在乏氧条件下引起DAMPs的释放更多,从而更能促进DC细胞的活化成熟。另外乏氧时CD44和CD69在CD8+T细胞表面上的表达显著增高。同时,细胞内和分泌的IFN-γ也显着增加。乏氧PAD@MS组的CD8+T细胞数量也有明显增殖。以上结果都证实了 PAD@MS可以明显提高MC38细胞的免疫原性,通过使DC成熟,进而激活CD8+T细胞的细胞杀伤作用。3.与游离药物组相比,PD@MS组和PAD@MS组均可显著增加药物在血液中的有效药物浓度且在血液中稳定性良好,有利于药物持续递送到肿瘤部位。相比于游离药物在体内的被快速代谢且在肿瘤内蓄积低,PAD@MS组有着很好的肿瘤蓄积能力,并且延长了药物在体内的循环时间,展现出优异的肿瘤内蓄积能力。PAD@MS在体内有着很好的肿瘤渗透能力,可以达到远离血管的深部肿瘤组织,可能是因为PAD@MS在肿瘤乏氧微环境分解成小分子颗粒,从而促进其渗透能力。4.在MC38荷瘤C57BL/6小鼠和CT26荷瘤BALB/c小鼠体内,PAD@MS能有效抑制结直肠癌的生长和延长小鼠的生存期,与α-PD-L1联用后效果显著增强,两者具有协同作用。PAD@MS处理组的小鼠血液、淋巴结和肿瘤中的DC细胞和巨噬细胞比例均有升高,可以通过抗原提呈促进T细胞的活化成熟—同时,巨噬细胞的表型更趋向于杀伤肿瘤的M1表型,可以分泌血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)杀伤肿瘤。DC细胞和巨噬细胞抗原提呈促进了 T细胞的活化成熟,同时也增加了血液、淋巴结和肿瘤中的CD4+T和CD8+T细胞比例,并降低了 Treg T细胞的含量,增强了抗肿瘤免疫应答,使得免疫激活比免疫抑制作用更强,使“冷”肿瘤变成了“热”肿瘤,进而重新编辑了肿瘤微环境。在机制上来说,CD8+T细胞分泌的IFN-γ可以通过降低细胞表面的SLC7A11表达,从而进一步加剧肿瘤细胞内氧化还原失衡进而促进肿瘤细胞发生铁死亡来杀伤肿瘤。PAD@MS治疗后未引起明显的组织器官病理学改变,并且拥有着宽泛的治疗窗,肝肾功能指标均未引起明显改变,可认为其是安全的,有转化价值的纳米药物。结论:具有乏氧响应型的PAD@MS赋予了纳米材料在血液循环中避免被清除并保持完整,通过减少正常组织暴露于铁死亡诱导剂来最大程度地减少副作用。到达肿瘤组织后,PEG响应乏氧肿瘤微环境而与纳米颗粒急剧解离,以促进药物的释放和肿瘤对药物的内吞,粒径减小的材料可帮助药物到达更深部的肿瘤位置。我们构建的PAD@MS纳米材料可以有效的通过诱导肿瘤细胞发生铁死亡和免疫原性死亡,发挥化疗协同免疫激活的作用,当与抗PDL1抗体(α-PD-L1)联合使用时,基于纳米颗粒的铁死亡诱导有效地抑制了肿瘤的生长,并通过增强更强的免疫应答显著延长了荷瘤小鼠的存活时间。目前我们的工作证明了通过肿瘤特异性铁死亡诱导对抗免疫抵抗的可行性,这种简单、可控和可扩展的纳米平台在铁死亡驱动的免疫治疗的临床转化中显示出广阔的潜力。

黑枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是茄科枸杞属多年生灌木,广泛分布于青海、新疆和甘肃等沙漠盐碱地区,是西部地区重要的药用植物资源和经济作物。黑枸杞富含多酚、黄酮和花青素等多种次生代谢物,对人体抗氧化等具有显著效果。近年来黑枸杞果实化学成分和生物活性研究成为热点,研究表明黑枸杞分布区域生态环境差异很大,且不同产地黑枸杞果实在营养成分及含量上都有差异。通过比较不同产地黑枸杞组分差异,并揭示组分代谢差异产生RAD001 NMR的潜在机制,有利于黑枸杞品种改良及药用成分资源利用。此外,深入研究黑枸杞果实多糖、多酚等功能性组分的胃肠道吸收代谢模式及改善肠道健康的作用机制将有助于合理利用黑枸杞药用及保健价值。1.以青海、内蒙古、甘肃、宁夏、新疆5个产地的黑枸杞果实为研究对象,系统测定5个产地黑枸杞果实粗多糖理化性质,结果表明5产地黑枸杞粗多糖单糖组分相同,而青海黑枸杞中总糖含量(47.47±0.34%)最高。分析黑枸杞总多酚、总黄酮、总花色苷含量发现,青海黑枸杞总多酚(36.78±0.38 mg/g DW)及总黄酮含量(25.55±0.28 mg/g DW)高于它4个产地黑枸杞。评估比较5产地黑枸杞果实购买PLX5622粗多糖和粗多酚体外抗氧化能力,发现青海黑枸杞果实粗多酚的DPPH(IC50=0.062±0.013 mg/mL)、ABTS+(IC50=0.218±0.039mg/mL)自由基清除能力最强。结合H2O2氧化损伤的Raw264.7细胞模型评估5产地粗多酚的细胞抗氧化能力,发现青海黑枸杞果实粗多酚能显著缓解H2O2对Raw264.7细胞造成的增殖抑制、减少细胞凋亡及ROS产生、上调抗氧化酶基因表达,下调炎症因子基因表达。以上结果表明青海黑枸杞果实含有更多抗氧化活性成分。2.为进一步挖掘5产地黑枸杞果实的差异活性化学组biogas upgrading分,借助代谢组分析5产地黑枸杞果实代谢谱,发现5个产地黑枸杞果实共有197种差异代谢物,其中16种有机酸及其衍生物、16种碳水化合物、25种苯丙素、12种花青素、33种类黄酮、24种生物碱、6种萜烯、7种维生素及其衍生物、14种氨基酸及其衍生物、16种类固醇,黑枸杞代谢成分具有地区差异性。富集分析差异代谢物发现,青海黑枸杞果实中多种苯丙烷及黄酮类化合物含量显著高于其他4个产地,其中10个上调代谢物与黑枸杞抗氧化活性显著相关。体外验证结果表明10个代谢物可有效清除DPPH(IC50范围为6.237～0.001 mg/mL)和 ABTS+(IC50 范围为 0.048～0.001 mg/mL)自由基,其中山奈酚-3-O-芸香苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷的两种自由基清除IC50=1 μg/mL,抗氧化活性最强。转录组分析表明,参与类黄酮、苯丙素和花青素生物合成的基因在青海黑枸杞果实中的表达水平显著高于其他产地的黑枸杞。结合枸杞基因组数据,鉴定LrFLS和LrCYP75B1是编码山奈酚-3-O-芸香糖苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷合成的限速基因。RT-qPCR定量结果显示,LrFLS和LrCYP75B1在青海黑枸杞成熟期和着色期均处于较高表达水平,且比其他4产地表达量约高4倍。通过在黑枸杞叶片中过表达LrFLS和LrCYP75B1发现,过表达LrFLS和LrCYP75B1可增加黑枸杞叶片中山奈酚-3-O-芸香苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷的3倍含量,并提高黑枸杞提取物的体外抗氧化活性。上述结果表明,青海黑枸杞富含黄酮类代谢物,其中山奈酚-3-O-芸香苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷两种黄酮物质的合成积累是青海黑枸杞高抗氧化活性的重要原因。3.为解析青海黑枸杞果实中山奈酚-3-O-芸香苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷的生物合成转录调控机制,利用黑枸杞不同发育时期转录组数据,构建黑枸杞中2个代谢物合成基因的调控网络。借助ChIp-qPCR、酵母单杂、LUC和EMSA等技术确定LrMYB94和LrWRKY32分别通过直接结合LrFLS和LrCYP75B1的启动子来激活黑枸杞中山奈酚-3-O-芸香糖苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷的合成。通过构建稳定过表达LrMYB94或LrWRKY32的黑枸杞愈伤组织,发现过表达LrMYB94或LrWRKY32可激活LrFLS和LrCYP75B1的表达,提高山奈酚-3-O-芸香苷和槲皮素-3-O-芸香糖苷含量,最终增强黑枸杞抗氧化活性。以上结果揭示了青海黑枸杞果实中关键抗氧化活性成分的转录合成调控机制。4.为了研究青海黑枸杞功能性组分(粗多糖、多酚、花色苷)在人体的消化吸收特征,构建体外胃肠道消化模型。结果表明黑枸杞果实多糖在胃肠消化后还原性糖从0.396±0.056 mg/mL增加为0.626±0.032 mg/mL,在多糖消化过程中未检测出游离单糖;果实多酚在胃肠消化后总多酚含量分别降低19.96%和21.01%,总黄酮分别降低16.60%和33.02%,且多酚粗提物代谢成分发生显著变化,胃肠消化后代谢物与肠道慢性疾病相关。通过大孔树脂纯化粗多酚,得到主要含有4种矮牵牛素和1种锦葵色素衍生物的纯化花色苷,其经胃肠消化后总花色苷含量降低11.3%。采用体外模拟研究青海黑枸杞功能性组分对肠道功能的作用,发现黑枸杞多糖可延缓葡萄糖的扩散,功能性组分均能抑制α-淀粉酶、胃蛋白酶、胰脂肪酶3种胃肠道主消化酶酶活,具有胆酸盐结合能力。上述结果说明青海黑枸杞多种活性成分可在胃肠中被少量吸收后改善肠道功能。5.为了探究青海黑枸杞功能性组分对肠道健康的影响,利用4%DSS自由饮用方式构建结肠炎模小鼠。进一步对结肠炎小鼠进行黑枸杞功能性组分灌胃处理后,检测小鼠各项病理指标。结果表明,黑枸杞功能性组分(粗多糖、多酚、花色苷)干预能减缓DSS引起的体重骤减、粪便便血、结肠缩短、DAI评分降低等发病症状,改善结肠炎小鼠结肠组织损伤及免疫器官指数上升。Elisa和PCR结果表明,黑枸杞功能性组分可通过降低促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平,有效减轻结肠炎相关炎症反应。同时,功能性组分降低氧化应激标志物MDA(65.89%)、MPO(49.50%)和H2O2(86.20%)的水平,增加抗氧化酶SOD(65.5%)、CAT(79.41%)和GSH-Px(53.44%)的表达,减轻结肠炎相关氧化应激反应。利用16S测序发现,黑枸杞功能性组分有助于恢复结肠炎模型小鼠紊乱的肠道菌群,并提高增加有益菌Lactobacillus、Lachnospira的丰度,减少有害菌Alloprevotella、Parabacteroides。此外,青海黑枸杞功能性组分对肠上皮细胞(IPEC-J2)无显著细胞毒性、小鼠主要器官HE染色无明显病理特征、血常规检测正常。上述结果表明青海黑枸杞功能性组分具有改善炎症性结肠的功能。本研究通过比较不同产地黑枸杞果实代谢差异,结合代谢组与转录组系统研究黑枸杞果实核心差异功能性组分的形成机制,为改良黑枸杞药材品质提供科学依据。进一步借助体外胃肠道消化模拟系统,探究黑枸杞主要功能性组分在胃肠道中的消化吸收模式,结合结肠炎小鼠模型研究黑枸杞功能性组分在体内改善肠道健康的作用机制,为后续深度开发黑枸杞药用及保健功能提供理论依据。

为了提高羊肉香肠的食用品质，降低产品的膻味，该研究采用乳酸菌和酵母菌复配发酵，探究菌株的协同作用对羊肉香肠食用品质的影响以及对最终成品膻味的脱除效果。该研究将前期从羊肉香肠GDC-0973 IC50中筛选得到的戊糖片球菌L7和近平滑假丝酵母Y22以2:1的比例复配发酵生产羊肉香肠，以不接种和单菌接种为对照组，分析了羊肉香肠的基本理化指标、感官品质、游离脂肪酸、挥发性物质和生物胺含量。实验结果显示复配接种组羊肉香肠的感官评分总分为88.5分，显著高于不接种组的69.5分（P＜0.05）。羊肉香肠成品中，复配接种组的挥发性物质种类更多，共检出91种。相比3个对照组，复配接种组羊肉香肠的膻味最弱，与羊肉膻味相关的肉豆蔻酸相较于不接种组降低了6.54％、棕确认细节榈酸降低了10.45％、硬脂酸降低了40.61％、油酸降低了17.55％。该研究表明，Small biopsy乳酸菌和酵母菌复配接种发酵能够降低羊肉香肠的膻味，提高羊肉香肠的可接受度，提升羊肉香肠的食用品质。

目的：研究脾气虚型免疫性血小板减quantitative biology少症(ITP)模型小鼠血清与脾脏组织中白细胞介素-27(IL-27)、白细胞介素-10(IL-10)的表达水平及意义。方法：24只白变种实验小鼠以区间分组法随机分为对照组、模型组、泼尼https://www.selleck.cn/products/Etopophos.html松组、健脾益气摄血组。除对照组外，其余组均以被动免疫造模法建立脾气虚型ITP小鼠模型。造模后，模型组、对照组用生理盐水灌胃，泼尼松组、健脾益气摄血组分别用泼尼松、健脾益气摄血颗粒灌胃。各组均灌胃1次/d,连续8 d。采用酶联免疫吸附试验selleck化学检测外周血中血小板计数及血清与脾脏中IL-27、IL-10表达水平。结果：与对照组比较，模型组血清和脾脏IL-27、IL-10均显著降低(均P<0.01)。与模型组比较，泼尼松组、健脾益气摄血组血清和脾脏IL-10均明显升高(P<0.05);泼尼松组、健脾益气摄血组血清与脾脏IL-27均有所升高，但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论：IL-27、IL-10可能在脾气虚型ITP中发挥保护性作用，且发挥作用的主要场所在外周血而非脾脏；此外泼尼松与健脾益气摄血颗粒治疗ITP的机制可能与提高IL-10的含量有关，而与提高IL-27的含量关系不大。

目的：探讨昆布的古今应用情况及用药经验，为昆购买E-616452布临床合理应用及相关产品研发提供依据。方法：基于《中医方剂大辞典》、2020年版《中华人民共和国药典》及《中华医典》等著作及中国知网数据库，收集含昆布方剂及临床研究文献，进行频数分析、关联规则分析、文献计量学分析及可视化处理。结果：共筛选出含昆布方剂342首，来自90种医籍。配伍分析发现，昆布多配伍化痰止咳平喘药、清热药、理气药等，与海藻配伍频率最高，其次为连翘、甘草、半夏等。分析主治病症发现，昆selleckchem GW-572016布多用于治疗瘿气、瘰疬、噎膈、疮等。1993年5月4日至2023年5月4日，中国知网共收录736篇含昆布临床文献，2000年左右，昆布多配伍夏枯草、黄药子等治疗甲状腺疾病、乳腺增生；直至2010年，昆布多糖及昆布多糖硫酸酯在治疗甲状腺疾病、乳腺增生等疾病中具有更大优势。结论：古代方剂与现代临床研究多集中于以昆布治疗瘿气，但古代含昆布方剂还可以治疗瘰疬、噎膈、咳嗽、疝、疮等病症，应用范围远超现代，且昆布解酒、瘦人等功效PCR Equipment并未在现代临床中得到应用。

R-spondin2（Rspo2）是蛋白家族RSPOs成员之一，其可以通过富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4/5（Leucine-richrepeat-containingGprotein-coupledreceptor4/5，LGR4/5）、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNRF3/RNF43（zinc and ring finger 3/ ring finger protein 43）、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（Heparan sulfate proteoglycans，HSPGs）和含GTP酶激活蛋白质1的IQ基序（IQ motif -containing GTPase-activating protein 1， IQGAP1）来调控Wnt/β-连环蛋白（catenin）信号通路，Wnt/β-catenin信号通路是目前研究最广泛且与基础骨生物学直接相关的信号通路，该通路中任何一环节出现问题都可能对骨的调控产生影响。近年来研究发现Rspo2可以通过Wnt/β-catenin对成骨细胞（osteoblast）、破骨IDN-6556价格细胞（osteoclast）和软骨细胞产生作用，并参与一些骨骼疾病如脊柱后纵韧带骨化（ossification of the posterior longitudinal ligament，OPLL）、骨关节炎（Osteoarthritis，OA）和类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的发生发展，因此对Rspo2的研究可能会成为骨相关疾病新的治疗方向。本Crizotinib临床试验文结合最新研究进展，就Rspo2的结构和主要功能、RspoCell Culture2调控Wnt/β-catenin信号通路的相关机制及其对骨骼系统的影响作一综述，以期为骨相关疾病的防治提供新的思路和途径。

目的 探究孤独症谱系障碍(ASD)中发现的转录因子EB(TFEB)基因3种变异对神经元轴突发育的影响及其机制。方法 构建与ASD相关的3个TFEB突变体质粒和TFEB shRNA干扰质粒，细胞转染上述质粒后通过免Z-VAD-FMK细胞培养疫荧光、细胞核质分离及蛋白免疫印迹检测TFEB变异是否改变其亚细胞定位；利用核糖体抑制剂CHX处理后经蛋白免疫印迹检测TFEB变异对其蛋白稳定性的影响；进行原代小鼠神经元培养并转染上述质粒，通过免疫荧光检测TFEB变异对神经元轴突生长发育的影响；使用实时定量PCR检测TFEB下游自噬-溶酶体基因的表达水平，以荧光素酶报告基因法测量TFEB的转录活性。结果 ASD相关突变体p.R22Q及p.R465W导致TFEB在细胞核的定位增加，但变异并不改变蛋白的稳定性。同时，野生型(WT)TFEB的过表达可增加神经元轴突长度，而ASD相关的TFEB突变体则不能。这表明这些突变导致TFEB促进神经元轴突生长的功能受损。同时，自噬激活剂Rapamycin可恢复由TFEB干扰引起的神经元轴突缩短。TFEB WT的过表达增加Ipatasertib分子式了下游自噬-溶酶体相关靶基因(LAMP1、SQSTM1、CTSB、CTSD、CTSF、MAPLC3)的表达，但ASD相关的TFEB突变体降低了对相关靶基因的调节能力。结论 TFEB变异可能导致自噬-溶酶体功能受损和神经元发育异常，为hepatic dysfunctionASD发病机制和潜在治疗靶点提供了新的见解。

目的：比较自体血小板浓缩生长因子（Concentratedgrowthfactor,CGF）与成纤维细胞生长因子（Basic fibrobNSC 127716体外last growth factor,bFGF）治疗慢性难愈性创面的疗效。方法：选择2021年1月-2022年6月笔者医院收治的110例慢性难愈性创面患者，按随机双色球法分成bFGF组和CGF组，各55例。bFGF组在常规治疗的基础上给予bFselleck HPLCGF外用治疗，CGF组在常规治疗的基础上给予CGF治疗。比较两组患者的创面缩小率、肉芽组织评分、创面愈合时间、疗效、不良反应、自主活动情况[Karnofsky功能状态评分表（Karnofskyperformancestatus,KPS）]及生活质量[生活质量调查表（Quality of life questionnaire-c30,QLQ-C30）]。结果：CGF组患者KPS、QLQ-C30评分、创面缩小率、肉芽组织评分及总有效率均高于bFGF组（P<0.05）,CGF组创面愈合时间短于bFGF组（P<0.05）。结论：相较于bFGF,CGF用于治疗慢性难愈性创面可加速创面愈Biomedical technology合，疗效更佳，值得临床推广应用。