S6 kinase 信号通路

目前,癌症仍是威胁人类生命和健康的重要疾病之一。尽管传统的癌症治疗技术,例如手术切除、药物化疗、放射治疗等,提高了部分患者的生存率,但是由于肿瘤的复杂性和多变性,这些治疗方式仍不足以满足所有病人的需求。近年来,随着纳米技术的飞速进步,易于改性及功能化的纳米材料因其小尺寸效应、生物相容性和实体瘤的高渗透长滞留效应(enhanced permeability and retentGlaucoma medicationsion,EPR)等独特优势被逐渐运用到肿瘤治疗中,并开发了一系列基于纳米技术的肿瘤治疗模式。声动力治疗(sonodynamic therapy,SDT)是一种利用超声波能量激活富集在病灶部位的声敏剂产生活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)来杀死细胞的新型肿瘤治疗模式。与传统的光动力疗法相比,声动力疗法安全性高、具有良好的组织穿透能力,可以对肿瘤深部组织进行治疗。近年来,研究人员开发了各种类型的声敏剂用于SDT治疗肿瘤,并取得了一些满意的治疗效果。其中,无机纳米材料因其稳定性高、易于功能化、具有良好的生物相容性等特点,受到了研究者们的广泛关注。然而,大多数无机纳米材料受到本身结构的限制,导致声催化效率较低,需要通过其他策略来提升声动力性能。结合近年来的研究结果表明,依靠单一的治疗模式难以取得理想的疗效,所以通过多种治疗手段联用的多功能纳米平台已经成为肿瘤治疗的研究重点。在本论文中主要围绕发展新型声催化无机纳米材料用于声动力治疗研究。通过不同的策略来增强无机纳米材料的声敏化性能,并联合其他治疗手段,构建了用于声催化介导的多功能纳米复合治疗平台。主要研究内容包括以下两部分:(1)通过水热法合成了具有中空介孔的二氧化钛(TiO_2)纳米球,并将非金属氮化碳量子点(g-C_3N_4 QD)表面沉积到TiO_2上,随后封装化疗药物罗米地辛(Romdepsin,RMD),最终形成了基于异质结构负载RMD的可超声激活的多功能纳米反应器(TCR),实现了声动力和化疗的联合疗法。后续通过各种体外表征手段评估各项理化性质。在细胞水平上,利用小鼠乳腺癌细胞探究TCR纳米复合材料产生ROS能力,通过实验结BMS-354825果表明该纳米复合材料在声动力治疗与化疗的联合作用下对肿瘤细胞显示出明显的毒性作用,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡。同时,能够有效触发免疫原性细胞死亡。通过尾静脉注射后,TCR能通过EPR效应在肿瘤区域被动高效富集,在超声作用下产生ROS及控制RMD的释放,以此实现肿瘤的联合治疗。通过免疫检查点抑制剂(PD-L1抗体)联合治疗,可以有效抑制远端转移瘤及肺部转移,显示出优异的抗肿瘤能力。(2)有研究表明缺陷型无机纳米材料在保持良好生物相容性的同时,可以提升传统无机纳米材料的性能,增强其声催化的效率。由此我们通过二次煅烧的方法合成了一种具有声动力性能的铁锚定氮缺陷型纳米催化剂(FeN_v/CN)。然后通过体外结构表征及化学探针证实该缺陷型纳米催化剂的声敏化效率及催化性能,发现由于缺陷引起的能带结构变化,增强了声动力产生ROS的能力。后续通过在表面修饰聚乙二醇(PEG)以及共价偶联小分子穿膜肽(cRGD),增加其血液循环时间以及主动靶向肿瘤的能力,得到了最终负载cRGD的缺陷型纳米复合材料(FPR)。随后通过细胞层面证实了在cRGD的存在下提高了细胞摄取能力。伴随着超声及催化产生大量ROS并消耗GSH,产生细胞毒性,并抑制谷胱甘寻找更多肽过氧化物酶活性,破坏癌细胞内氧化还原平衡,最终导致脂质过氧化物累积,诱发铁死亡。通过体内实验结果表明,这种治疗方式可以诱导癌细胞发生免疫原性死亡,从而抑制肿瘤发生。该纳米平台可以有效提高肿瘤的治疗效果。

目的 观察紫癜肾煎剂对HSPN模型大鼠的治疗作用，并基于PI3K/AKt和HIF-1α/VEGFA信号通路探讨其作用机制。方法 随机选5只SD大鼠分为正常对照组，其余大鼠应用“BSA+LPS+CCL4”联合干姜建立HSPN大鼠模型，21周后随机抽取selleck MK-4827正常对照组和造模组的大鼠各一只，取肾组织固定包埋，采用免疫荧光检测造模组大鼠肾组织中IgA沉积并伴有蛋白尿，正常组无上述表现，提示造模成功。将造模成功的HSPN大鼠模型随机分模型组、紫癜肾煎剂低、高剂量（6.10、24.40g/kg）组和西药（3.9biosilicate cement3mg/kg）组，每组5只。给药结束后，采用溴甲酚紫法测定尿蛋白浓度，计算24h尿蛋白定量；各组大鼠肾组织病理和免疫荧光检测；采用Western blotting法检测SD大鼠肾组织PI3K、AKt、HIF-1α、VEGFA蛋白表达情况。结果 紫癜肾煎剂可以显著降低24h尿蛋白(P﹤0.05)，减少肾小球系膜区免疫复合物KPT-330体内实验剂量沉积；与模型组比较，中药方组和西药组大鼠肾组织PI3K、AKt、HIF-1α、VEGFA蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 紫癜肾煎剂能减少HSPN大鼠24h蛋白尿，改善肾功能及肾组织病理损伤，延缓HSPN病情进展，其机制可能与调控PI3K/AKt和HIF-1α/VEGFA信号通路有关。

背景:胃癌是消化系统中常见的一种恶性肿瘤,其恶性度高,预后差,给人民群众的身体健康带来了极大的危害。胃癌在我国发病率远高于欧美国家。随着辅助化疗的应用,以及新型靶向药物的研发,胃癌病人的短期预后有所改善,但化疗药物以及靶向药物在治疗过程中常发生耐药情况,导致胃癌的病人长期预后并不理想。因此,胃癌的生物学机制研究对于新型药物的研究和新治疗靶点的开发都显得尤为重要。铁死亡这一新型程序性死亡在多种疾病的发生、发展中起到关键作用,在胃癌领域更是被广泛的研究,并取TGF-beta/Smad抑制剂得一定进展。Anoctamins(ANO),也称为TMEM16蛋白,参与多种细胞膜功能,包括离子转运,促进脂质在质膜双层中的双向重新分布和对其他膜蛋白的调节。其中,ANO6(TMEM16F)是TMEM16蛋白家族成员之一,具有独特的功能,是磷脂酰丝氨酸从质膜内叶到外小叶易位过程的主要贡献者。有研究表明,ANO6的激活是细胞铁死亡的关键步骤,这一发现明确了ANO6在铁死亡过程中的重要作用。而ANO6在胃癌铁死亡机制中尚未有明确的研究。通过对铁死亡在胃癌领域的进一步研究有望找到新的胃癌治疗靶点。目的:本研究旨在通过研究ANO6在胃癌铁死亡过程中所扮演的角色以及可能的分子机制,为胃癌的诊治提供新的治疗靶点和理论依据。方法:1、利用TCGA、GEO、HPA数据库,最终筛选得出目的基因ANO6。分析预测在胃癌组织中癌和癌旁组织中ANO6的差异表达与胃癌患者预后的关联。利用TCGA-STAD数据集对目的基因表型预测,研究ANO6表达水平与胃癌患者性别、肿瘤TNM分期、肿瘤分级、及预后的相关性。通过Western blot、免疫组化验证ANO6在胃癌临床样本中的表达情况,验证生物信息学分析的结果。2、使用人胃癌细胞系(AGS、MGC-803、HGC-27、MKN-45、BGC-823),通过Western blot技术检测ANO6表达水平,根据表达水平建立过表达及敲低稳定株。通过q PCR检测细胞转染效率。通过平板克隆、CCK-8及Ed U实验对胃癌稳定过表达及敲低细胞株增殖能力进行检测。通过裸鼠皮下荷瘤实验,研究ANO6对胃癌细胞增殖的影响。通过免疫组化对皮下荷瘤进行染色,研究ANO6对胃癌细胞增殖能力的影响。3、通过GSEA预测ANO6相关通路和潜在的下游基因。通过CalceinAM/PI双染色技术、MDA检测、透射电镜研究ANO6差异性表达对胃癌bio-based economy细胞铁死亡的影响。4、确定ANO6下游基因后,通过Western blot等技术研究ANO6参与胃癌肿瘤相关表型及铁死亡过程所介导的下游通路。5、构建潜在下游基因ACSL4过表达质粒(ACSL4)和ACSL4敲低质粒(sh ACSL4),利用Western blot、CCK-8、平板克隆、MDA检测、Ed U实验回复上述ANO6调控胃癌铁死亡通路,进一步明确ANO6与ACSL4表达水平之间关系以及对胃癌细胞增殖及铁死亡敏感性的影响。6、通过Western blot和免疫组化技术,对45例临床胃癌病人手术切除肿瘤组织样本中ACSL4和ANO6表达水平进行检测,验证表达水平相关性。最后通过TCGA数据库预测下游基因ACSL4差异表达对胃癌患者预后的影响。结果:1、通过TCGA数据库对目的基因表型预测,结果显示ANO6的表达水平与胃癌肿瘤分期、肿瘤分级、肿瘤浸润深度密切相关,与胃癌患者性别、淋巴结转移、远处转移转移无关。ANO6高表达提示更强的胃癌增殖能力,且病人的预后更差。2、建立ANO6敲低及过表达细胞系,通过平板克隆、CCK-8、Ed U染色实验表明ANO6高表达可以促进胃癌细胞增殖,而低表达可以抑制胃癌细胞增殖。通过裸鼠皮下荷瘤、免疫组化检测增殖能力(Ki67),结果表明,ANO6过表达显著促进胃癌细胞在体内生长和增殖能力,而敲低ANO6可以抑制胃癌细胞在体内的生长和增殖能力。上述结果表明,ANO6可以在体外及体内抑制胃癌细胞增殖。3、通过生信分析发现,ANO6表达上调与促癌通路相关。结合国内外最新研究成果通过Western blot对铁死亡经典通路检测发现ANO6与ACSL4表达呈负相关。构建ACSL4过表达质粒和敲低质粒,并进行下游回复实验。通过Western blot研究胃癌细胞中ACSL4是否会影响ANO6的表达,结果表明,改变ACSL4表达水平ANO6表达水平无明显变化。利用CCK-8、集落形成实验研究ACSL4对胃癌细胞增殖能力的影响,结果表明,ACSL4表达水平与胃癌细胞增殖能力呈正相关。4、通过Calcein-AM/PI双染实验、药物对比实验、MDA检测实验、透射电镜实验表明,ANO6可能通过调节ACSL4通路影响胃癌细胞的铁死亡;ANO6高表达能够抑制胃癌细胞铁死亡并促进胃癌的增殖,ANO6低表达能够促进胃癌细胞铁死亡过程并抑制胃癌的增殖。通过向稳转细胞系中加入铁死亡激活剂(Erastin)进行Ed U实验、MDA检测,研究ACSL4对胃癌细胞铁死亡的影响,结果表明,ACSL4高表达促进胃癌细胞铁死亡。上述结果表明,ACSL4促进胃癌细胞铁死亡,从而抑制胃癌细胞增殖。5、本研究前述工作推测ANO6可能通过ACSL4影响胃癌的铁死亡过程,结合国内外最新研究,ANO6可以影响p-AKT(AKT磷酸化),而p-AKT可以影响ACSL4水平的变化。通过Western blot对ANO6、ACSL4、p-AKT水平进行检测,初步研究其关系。再加入AKT磷酸化抑制剂(AZD5363),进一步验证其表达水平之间的作用关系。确定ANO6是通过p-AKT来调控ACSL4水平。6、临床组织标本进行Western blot实验对ACSL4表达水平进行检测,结果证实ACSL4在胃癌组织中低表达。对临床组织标本进行ANO6及ACSL4免疫组化对比检测,结果表明ANO6与ACSL4在胃癌组织中的表达水平呈负相关。利用TCGA数据库进行ACSL4生存概率分析,结果显示相对于低表达组,高表达组与更佳的预后相关。结论:1.ANO6在胃癌组织中异常高表达,与患者Captisol体外预后不良密切相关。2.过表达ANO6可以促进胃癌细胞在体内及体外的增殖能力。3.ANO6通过上调p-AKT抑制ACSL4表达进而抑制胃癌铁死亡过程,从而促进胃癌的增殖。

目的:研究水半夏水煎液的化学成分。方法:利用中压反相色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱等方法对水半夏水煎液进行分离纯化,并根据理化性质及核磁共振波谱、质谱等数据分析鉴定化合物结构。结果:从水半夏水煎液中分离得到25个化合物,分别鉴定为:腺苷(1)、原儿茶酸(2)、苯乙胺(3)、(S)-2-羟基-3-(4′-羟基苯)丙酸(4)、2,5-二羟基苯甲酸(5)、L-色氨酸(6)、(3S)-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(7)、环(天冬酰胺-苯丙氨酸)(8bionic robotic fish)、(-)-(1S,3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(9)、(S)-3-苯基乳酸(10)、烟酰胺(11)、(+)-异落叶松树脂醇(12)、松脂素(13)、stagonoculiazin(14)、1-棕榈酰基-3-O-β-D-半乳糖基甘油酯(15)、亚麻酸(16)、1-亚油酰甘油酯(17)、1-linoleoylglycerol(18)、benzenetridecanoic acid(19)、亚油酸甲酯(20)、(E)-9-十八碳烯酸甲酯(21)、亚油酸(22)、10,13-octadecadienoic acid(23)、(8-hydroxymethylen)-trieicosanyl acetate(24)。结论:其中,化合物selleck激酶抑制剂2～5、8～selleck SBE-β-CD11、14、15、17、18、21、23、24为首次从该植物中分离得到。

目的 探讨血清免疫球蛋白G(IgG)和biotic elicitation亚型免疫球蛋白G4(IgG4)联合检测在儿童自身免疫性肾小球肾炎中的诊断价值。方法 选择2020年1月—2021年9月泰安市妇幼保健院收治的42例自身免疫性肾小球肾炎患儿和selleck30例同年龄段健康体检者作为研究对象，按病情分为对照组(30例，同年龄段健康体检者)与观察组(42例，自身免疫性肾小球肾炎患儿)。比较IgG、IgG4联合检测诊断在儿童自身免疫性肾小球肾炎中的应用情况。结果 观察组IgG、IgG4检测值和IgG4/IgG均高于对照组，差异均有统计学意义(t=14.380、208.901、30.232,均P<0.05)。观察组患儿IgG、IgG4及两项指标联合检测所检出的阳性人数显著高于对照组，差异均有统计学意义(χ~2=18.574、33.826、56.531,均P<0.05)。观察组中，治疗后患儿的IgG、IgG4检测值和IQ-VD-OphgG4/IgG均低于治疗前，差异均有统计学意义(t=6.727、99.303、11.593,均P<0.05)。IgG、IgG4、联合的AUC分别为0.745、0.787、0.829,联合检测的AUC最大，预测价值更高。结论 将IgG、IgG4联合检测应用到儿童自身免疫性肾小球肾炎中，能帮助医师有效评估诊断受检者的免疫功能状态，在临床诊疗中有较高预测价值，利于医师制定更有针对性的诊疗方案，对促进患儿机体的恢复有重要意义，值得推广应用。

由于三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)缺乏有效的治疗靶点,手术治疗和传统化疗是其最主要的治疗方式,但仍表现出较高的复发率和死亡率。免疫治疗是一种具有潜力的治疗方式,但单独应用于TNBC的治疗效果有限。化学免疫疗法是应用了化疗药物的细胞毒性作用和免疫调节作用,联合免疫治疗策略协同抗肿瘤的一种治疗方式,具有广泛应用前景。然而,提高协同治疗的疗效并减少多种药物的副作用仍然是化学免疫疗法面临的主要挑战。在过去的几十年里,药物递送系统的出现是解决这一问题最有潜力的策略之一。将药物递送系统作为化学免疫治疗的载体可以延长药物的半衰期、增加药物累积、靶向递送药物至特定靶点,从而最大限度地减少对非靶组织的影响,为TNBC的化学免疫治疗提供了更精确和更有针对性治疗模式。活细胞可作为具有高度特异性和持久性的新型疗法和药物载体。通常利用物理、化学和材料方法将治疗药物负载到细胞内或固定在细胞膜表面,赋予细胞新的治疗功能。既往研究中发现通过在液氮中快速冷冻活肿瘤细胞制备的“死细胞”保留了源细胞的主要结构和向病变部位的趋化性,但失去了selleck合成增殖能力和致病性,使它们成为了理想的药物载体。此外,由于细胞表面蛋白和肿瘤相关抗原(tumor associated antigens,TAAs)等被完整保存在细胞中,使经液氮处理后的细胞可以作为肿瘤疫苗,激活并诱导树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟,促进抗肿瘤特异性免疫反应。当肿瘤细胞受到外界刺激发生死亡的同时,由非免疫原性转变为免疫原性而介导机体产生抗肿瘤免疫应答的过程被称为免疫原性死亡(immunogenic cell death,ICD)。在ICD引发的适应性免疫反应和质膜通透的过程中,垂死的肿瘤细胞释放多种损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DAhttps://www.selleck.cn/products/plx5622.htmlMPs),他们与DC等抗原提呈细胞上的模式识别受体结合,激活DC成熟并吞噬肿瘤抗原,随后将其呈递给T淋巴细胞,从而使免疫活性宿主在没有任何佐剂的情况下可以引发针对死亡细胞相关抗原的特异性免疫反应。传统化疗药物不仅可以诱导肿瘤细胞凋亡,还可以通过诱导ICD促进肿瘤特异性免疫反应或消除免疫抑制性肿瘤微环境等机制发挥免疫调节作用,增强肿瘤细胞的佐剂性。此外,化疗的免疫调节作用可与免疫检查点阻断疗法相结合,共同促进DC的趋化,进而增强免疫治疗的活性。基于上述内容,本课题设计了经液氮冷冻制备(liquid nitrogen-treated,LNT)细胞,将其作为载体负载了具有ICD诱导作用的化疗药物紫杉醇(paclitaxel,PTX),制备了具有免疫刺激能力的细胞载药系统(PTX@LNT),并探究了其在肿瘤治疗和预防中的潜在应用和作用机制。此外,我们设计了PTX@LNT细胞载药系统与程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)抑制剂的联合治疗策略,探究了联合治疗对转移性肿瘤的治疗效果,实现了化疗和免疫治疗的协同治疗。本研究分为两个部分:第一部分制备了经液氮快速冷冻处理的乳腺癌细胞-LNT细胞,和基于LNT细胞负载化疗药物PTX的细胞载药递送系统(PTX@LNT)。经液氮快速冷冻的LNT细胞保留了完整的细胞结构,但失去了增殖能力和致病性,是理想的药物载体。此外,肿瘤细胞的内源性危险信号和TAAs等都完整保留在了LNT细胞中,使LNT细胞可以作为外源性疫苗,刺激DC成熟并激发机体的特异性抗肿瘤免疫应答。PTX是治疗TNBC最常用的化疗药物之一,不仅可以直接杀伤肿瘤细胞,还可以诱导肿瘤细胞发生ICD,通过释放TAAs和DAMPs,促进DC成熟并将抗原提呈给T淋巴细胞,增加了肿瘤的免疫原性。我们通过混合孵育的方式将PTX负载到LNT细胞中,获得的PTX@LNT载药系统具有以下优势:(1)具有高效的载药效能,载药率达到50%;(2)具有基于化疗的有效的ICD诱导作用,PTX@LNT与游离PTX具有相似的细胞毒性效应和ICD诱导能力Populus microbiome,通过增加DAMPs的分泌,提高了肿瘤的免疫原性,进而诱导DCs成熟;(3)保留了肿瘤抗原和内源性危险信号,是诱导肿瘤抗原特异性免疫应答的免疫刺激递送系统;(4)制备过程简单,具有广泛的临床应用前景。第二部分验证了PTX@LNT细胞载药系统在小鼠TNBC模型中的抗肿瘤效果和免疫调节机制,并与PD-L1抑制剂联合治疗乳腺癌的肺转移。LNT细胞在动物模型中不具有增殖能力和致病效果,并可作为外源性疫苗有效预防肿瘤的生长。PTX@LNT载药系统在荷瘤小鼠模型中显示出最强的肿瘤抑制效果,PTX在杀伤肿瘤细胞的同时触发ICD效应,提高了肿瘤的免疫原性;此外,具有免疫激活效应的LNT细胞可诱导抗原特异性免疫细胞反应,与ICD效应协同增加了肿瘤组织中免疫细胞浸润水平,增强了抗肿瘤治疗效果。PTX@LNT显著促进了肿瘤组织中成熟DCs和CD8+细胞毒性T淋巴细胞的浸润,并通过减少调节性T细胞比例改善了TNBC免疫抑制的肿瘤微环境。然而,PTX的应用导致肿瘤组织PD-L1表达增强,因此我们在PTX@LNT治疗的基础上联合PD-L1抑制剂,通过阻断PD-1/PD-L1通路,重新激活耐受的T细胞功能并增加其对肿瘤的杀伤效果,有效地抑制了肿瘤的肺转移,并延长了小鼠的生存时间。综上所述,本文以LNT细胞载药递送系统为基础,通过负载化疗药物PTX成功构建了TNBC的治疗体系,在原发肿瘤和肺转移的治疗中展现出了巨大潜力。PTX@LNT具有LNT细胞的免疫刺激作用和PTX的ICD诱导能力,在杀伤肿瘤细胞的同时可以协同激活肿瘤特异性免疫反应,与免疫检查点抑制剂的联合治疗策略进一步增强了治疗效果,具有广泛的临床应用前景。

目的:本研究回顾性分析以FOLFOX(Oxaliplatin,5-fluorouracil,and Leu-covori n)方案为主的肝动脉灌注化疗(Hepatic Arterial Infusion Chemotherapy,HAIC)与经动脉化疗栓塞术(Transarterial Chemoembolization,TACE)联合多靶点酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitors,TKI)及免疫检查点抑制剂(Immune Checkpiont Inhib itors,ICI)治疗中晚期肝癌的临床疗效及安全性,为中晚期肝点击此处癌患者治疗方式或途径提供参考。方法:回顾性收集2018年05月至2022年11月在右江民族医学院附属医院以及右江民族医学院附属西南医院接受治疗的肝癌患者,符合纳入/排除标准。接受FOLFOX-HAIC+TKI+ICI治疗方案的中晚期HCC患者分为A组,接受TACE+TKI+ICI治疗方案的中晚期HCC患者分为B组。收集两组患者的基本临床资料及与治疗相关的不良事件。采用修改版实体瘤肿瘤疗效评价标准对肝内目标病灶进行疗效评价,应用x~2检验比较A、B两组间肿瘤客观缓解率和疾病控制率的差异。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,得出患者的中位无进展生存期和中位总生存期,使用Log-rank法检验分析生存曲线的差异。在单因素分析后,将对可能影响患者预后的因素纳入Cox比例风险回归模型进行多因素分析。采用美国国家癌症研究所常见不良事件评价标准对治疗过程中发生的不良事件进行评判及分级,并比较A、B两组患者不良事件的发生率和严重程度。结果:(1)本研究A组纳入38例患者,B组纳入47例患者,两组患者在治疗前各临床基线特征具有可比性(P>0.05)。(2)FOLFOX-HAIC+TKI+ICI组(A组)患者的肿瘤客观缓解率、疾病控制率分别为52.63%和76.32%。TACE+TKI+ICI组(B组)患者的肿瘤客观缓解率、疾病控制率分别为29.79%和55.32%。A组患者总体肿瘤客观缓解率、疾病控制率较B组患者更有优势,差异有统计学意义(P=0.033、P=0.044)。(3)两组患者中位无进展生存期分别为9.0个月(95%置信区间:8.191-9.809)和7.0个月(95%置信区间:5.802-8.198),差异有显著统计学意义(P=0.002)。两组患者中位总生存期分别为25.nerve biopsy0个月(95%置信区间:21.376-28.624)和18.0个月(95%置信区间:11.676-24.324),差异具有统计学意义(P=0.006)。(4)单因素分析结果表明联合治疗前AFP水平、联合治疗方案是本研究中影响中晚期肝癌患者总生存期的独立预后因素(P=0.004,P=0.006),多因素Cox回归模型分析结果表明联合治疗前AFP水平、联合治疗方案是本研究中影响中晚期肝癌患者总生存期的独立因素(P=0.020,P=0.027)。(5)在治疗安全性方面,两组患者均未出现与治疗相关性死亡事件。两组患者在不良事件发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)相比TACE联合靶免治疗,FOLFOX-HAIC联合靶免治疗初步显示出在肝癌治疗中的应用前景。(2)本研究结果表明联合治疗前AFP水平、联合治疗方案是影响中晚期肝癌患者预后的危险因素。(3)本研究结果表明FOLFOX-HAIC联Ceralasertib使用方法合靶免治疗中晚期肝癌安全可行。

第一章 HSF2BP基因突变在POI中的致病机制研究研究背景:早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)是指女性40岁之前出现卵巢功能减退,表现为月经周期异常,伴有血清促性腺激素水平升高,雌激素水平下降。POI病因高度异质,目前已知的致病因素包括遗传因素和非遗传因素,但仍有50%以上的POI患者病因不明确。遗传缺陷可以解释20%左右POI患者的发病原因,探寻新的致病基因并揭示其致病机制是POI病因学的研究重点。近年来,随着POI家系中全外显子组测序(Whole exome sequencing,WES)的广泛应用,发现了系列POI致病新基因,值得关注的是,致病变异在DNA损伤修复和减数分裂相关基因中出现显著富集,提示DNA损伤修复通路和减数分裂基因对卵巢储备的建立和功能维持具有重要作用。第一次减数分裂是卵母细胞发生发育的关键步骤。在第一次减数分裂前期,双链DNA在SPO11作用下发生程序性的断裂,双链断裂部位经剪切修饰形成3’端暴露的单链 DNA(Single-strand DNA,ssDNA)。BRCA2、RAD51、DMC1 等分子识别并定位在ssDNA上,随后完成同源重组(Homologous recombination,HR)和交叉互换等过程。HSF2BP是近年来新发现的一个蛋白分子,它可与BRCA2和BRME1结合形成稳定的三聚体结构,招募RAD51和DMC1定位到ssDNA,完成单链入侵。研究发现,Hsf2bp基因敲除雌鼠的卵母细胞由于RAD51和DMC1在ssDNA上的定位明显减少,染色体联会延迟,导致减数分裂进程受阻,卵母细胞数量明显减少,出现卵巢萎缩、生育力降低的表型。最近,在一个POI家系中发现HSF2BP纯合致病错义突变。然而,HSF2BP基因缺陷在散发性POI患者中尚未见报道。研究目的:本研究利用1030例POI-WES数据库进行HSF2BP的突变筛选,探究HSF2BP基因突变在散发性POI中的作用及其致病机制。研究方法:在1030例散发性POI-WES数据中对HSF2BP基因突变进行筛选,对筛选出的突变进行ACMG评级和Sanger测序验证。根据突变信息构建HSF2BP野生型和突变型质粒,并在HeLa细胞和KGN细胞内过表达质粒;通过细胞免疫荧光实验观察过表达蛋白在细胞内的分布,分析突变对蛋白定位的影响;利用依托泊苷(Etoposide,ETO)和丝裂霉素C(Mitomycin,MMC)诱导DNA损伤,并通过Western blot检测yH2AX水平,分析突变对HSF2BP蛋白的DNA损伤修复能力的影响。研究结果:通过在散发性POI-WES数据库中对HSF2BP的突变筛选,我们发现2例患者分别携带HSF2BP纯合错义突变:c.382T>C(p.C128R)和 c.557T>C(p.L186P)。细胞免疫荧光实验发现,HSF2BP野生型蛋白在细胞核和细胞质中均有分布,而突变型蛋白在细胞核内分布明显减少,说明突变影响了 HSF2BP蛋白在细胞核内的定位;DNA损伤修复实验显示,过表达野生型HSF2BP蛋白的细胞γH2AX水平在去除诱导剂后可快速恢复到正常,而过表达突变型HSF2BP蛋白的细胞在去除诱导剂并恢复一段时间后,γH2AX的水平仍明显高于未损伤组,提示突变损伤了 HSF2BP蛋白对DNA损伤的修复能力。研究结论:本研究首次在散Ipatasertib配制发POI患者中发现HSF2BP基因纯合致病错义突变,进一步强调了DNA同源重组相关基因在POI发病机制中的重要作用,丰富了 POI的致病基因谱。第二章 FBH1基因在卵巢发育及功能维持中的作用观察及在POI发病中的作用研究研究背景:减数分裂对于二倍体受精卵的产生以及维持后代遗传信息的稳定性具有重要意义。在哺乳动物第一次减数分裂前期,染色体以同源DNA序列作为模板进行同源重组,促进双链DNA断裂(DNA double strand breaks,DSBs)的修复,为生殖细胞基因组稳定性和多样性奠定了基础。同源重组异常会导致减数分裂过程受阻,DSBs不能正常修复,进而导致不孕、非整倍体相关的出生缺陷和不明原因的妊娠丢失。因此,这一过程需要各种机制精密调控,保证重组的正确进行。FBH1,又被称为FBX018,属于UvrD解旋酶蛋白家族,其编码的蛋白N端的F-box功能域可与SKP1和CUL1结合构成具有泛素连接酶活性的SCF复合体。在裂殖酵母减数分裂过程,SCF复合体可以识别ssDNA上的RAD51并将其解离下来,Fbh1的缺失导致RAD51在DNA上的负载增加,染色体不能正常分离,影响孢子活性。小鼠生殖细胞中SCF复合体组分Skp1的缺失导致生殖细胞减数分裂同源重组障碍,雌雄小鼠均不育。然而FBH1在哺乳动物生殖细胞减数分裂中的作用以及是否参与人POI的发病尚缺少研究。研究目的:本研究利用Fbh1基因敲除小鼠对Fbh1在卵巢储备建立和功能维持中的作用进行观察;利用临床POI病例资源进一步探究FBH1基因缺陷与POI发生的关系。研究方法:通过CRISPR/Cas9技术构建Fbh1基因敲除小鼠,检测雌鼠生育力变化,观察青春期及成年雌鼠的卵巢形态,计数卵母细胞,探究Fbh1基因缺失对卵巢功能的影响。通过在1030例POI-WES数据中对FBH1基因突变进行筛选,对筛选出的突变进行致病性分析,探究FBH1基因变异在人POI致病中的作用。研究结果:通过CRISPR/Cas9技术成功构建Fbh1基因敲除小鼠并进行基因型鉴定。生育力检测显示,Fbh1-/-雌鼠平均每月产仔窝数、平均每窝产仔数与野生型之间无明显差异,提示Fbh1-/-雌鼠生育力正常。卵巢组织IDN-6556小鼠形态学观察显示,21日龄和2月龄的Fbh1-/-雌鼠卵巢大小、形态与野生型之间无明显差异,2月龄雌鼠卵巢卵母细胞计数显示Fbh1-/-卵巢各级卵泡均存在且比例正常,提示Fbh1基因敲除后小鼠卵巢发育未发生明显变化。借助本中心POI-WES数据库,在POI患者中发现了FBH1高致病风险纯合突变:c.1212G>T(p.R404S)。突变位于FBH1基因7号外显子的第一个碱基,该位置的突变会影genetic heterogeneity响外显子的剪切,导致开放阅读框的改变,可能影响蛋白结构和功能。研究结论:本研究构建的Fbh1基因敲除小鼠模型提示Fbh1基因的缺失对雌鼠的生育力和卵巢发育未造成显著影响,对小鼠卵巢功能的远期影响仍需继续观察。尽管在POI患者中发现了FBH1潜在致病风险纯合变异,但FBH1在人POI中的致病性有待进一步研究。

目的：了解南通市放射工作人员从业10年前后主要体检指标的变化，为放射管理及放射工作人员健康监护提供科学依据。方法：选取2022年和2012年均在我中心体检的在岗放射工作人员418例，比较两次职业体检血细胞、甲状腺功能及眼晶状体的变化。结果：2022年放射工作人员白细胞、游离三碘甲状腺原氨酸（FT_3）、游离甲状腺素（FT_4）、眼晶状体异常率以及红细胞、血红蛋白、血小板、FT_3、FTtissue biomechanics_4水平高于2012年，差异均有统计学意义（P<0.05);2022年放射工作人员白细胞水平低于2012年，差异有统计学意义（P<0.05);2022年女性放射工作人员白细胞水平低于2012年，男性和女性放射工作人员红细胞、血红蛋白、血小板水C59生产商平均高于2012年，男性FT_3、FT_4、水平高于2012年，差异均有统计学意义（P<0.05);2022年女性白细胞异常率高于男性Vorinostat生产商，男性FT_3异常率高于女性，差异均有统计学意义（P<0.05）；晶状体异常率随年龄及工龄的增加而升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：长期电离辐射对放射工作人员血细胞、甲状腺功能、晶状体产生不同程度的影响，企事业单位应加强放射管理，改善工作环境，从业人员要增强辐射防护意识。

目的:探讨26G留置针在成人血液病病人静脉输血中的应用效果。方法:选取2020年7月—12月山东省某三级甲等医院血液病并需静脉输血病人400例为研究对象，按随机数字表法将病人分为观察组和对照组各selleck抑制剂200例。观察组采用26G普通留置针，对照组采用24G普通留置针，均为同一生产厂家提供，比antibiotic residue removal较两组病人一次穿刺成功率、穿刺疼痛程度、输血时限、留置时间、静脉炎发生率、导管堵管情况。结果:观察组一次穿刺成功率、留置时间明显高于对照组，疼痛程度、静脉炎发生率明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。两组病人留置针堵管率、静脉输血完成时限比较差异无统计学意义（P>0.05），观察组输血时限满足要求。结论:26G留置针可以满足成人各类血制品静脉输注的时限要求，一次穿寻找更多刺成功率高，疼痛程度低，留置时间长。