S6 kinase 信号通路

目的 探讨线粒体D-环区(D-Loop区)单S63845说明书核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)与喉癌发病风险的关系。方法 实验标本取自河北医科大学第四医ICI 46474 molecular weight院耳鼻咽喉-头颈外科行喉癌手术的Lethal infection患者71例及在该院体检中心行健康查体的人群159例。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增目的片段，并进行线粒体D-Loop区测序。采用χ~2检验分析不同SNPs与喉癌发病风险之间的关系，并分析与喉癌发病相关的SNPs与患者临床特征的关系。结果 线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区的SNPs与喉癌的发病风险有关，73G、309C、315C及16319G基因型可能增加了喉癌的发病风险，而524C、556A、16288T、16291C及16311T基因型可能降低了喉癌的发病风险。结论 线粒体D-Loop区SNPs可作为预测因子，用于提高喉鳞状细胞癌患者的早诊率，指导喉鳞状细胞癌患者的临床治疗。

黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)作为一种有效的免疫激活剂,已广泛应用于水产养殖业中,但其发挥作用的机制尚不清楚。本文首先建立了福尔马林灭活溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)诱导的大黄鱼(Larimichthys crocea)巨噬细胞炎症模型,通过对分离的大黄鱼原代巨噬细胞(prima获悉更多ry head kidney macrophages,PKM)进行1×10~3、1×10~4、1×10~5、1×10~6和1×10~7cfu/m L的灭活溶藻弧菌梯度处理实验,发现灭活溶藻弧菌可以显著降低PKM细胞活性,并在1×10~6cfu/m L时达到半致死剂量。同时通过流式细胞术检测发现,1×10~6cfu/m L的灭活溶藻弧菌可以显著诱导PKM活性氧的产生和细胞凋亡的发生,表明灭活溶藻弧菌可以诱发PKM产生细胞损伤。然而,当用50、100、200、400和800μg/m L的APS预处理PKM 24 h后,再经灭活溶藻弧菌诱导,发现细胞活性的降低被显著改善,并且当APS的浓度达到200μg/m L时对灭活菌诱导的细胞毒性的抑制效果趋于稳定,进一步检测活性氧生成量和细胞凋亡发现二者也被显著抑制。同时,荧光定量PCR检测发现,通过灭活菌及APS预处理后,在4 h时灭活菌诱导PKM炎症因子IL-1β和IL-6上调表达的效果最显著,且此时APS对其诱导的炎症反应的抑制效果也同样最明显。故选取4 h这一时间点的样品进行转录组测序,进一步深入探究APS的保护机制。转录组测序结果表明,在用灭活溶藻弧菌处理后,PKM中免疫相关基因(TLR5s、TLR13、Clec4e、IKK、IκB、BCL-3、NF-κB2、REL、IL-1β和IL-6)和细胞焦亡相关基因(caspase-1、NLRP3和NLRC3)的表达显著上调。而用APS预处理后,上述上调的基因基本都被抑制,其中TLR5s、BCL-3、REL、caspase-1、NLRP12、IL-1β和IL-6与灭活菌处理组相比显著下调。进一步通过体外试验发现灭活菌处理后,PKM细胞出现明显的溶胀现象,PI染色证明细胞膜完整性的丧失,LDH释放检测表明细胞培养液上清液中LDH含量显著增加。而经APS预处理后,这些现象均被有效缓解。本研究结果表明,APS能够保护大黄鱼PKM免受灭活溶藻Labral pathology弧菌诱导的炎症损伤,转录组学分析初步揭示其可能LY2157299通过抑制灭活菌激活的NF-κB和细胞焦亡信号通路发挥抗炎作用,进一步通过体外试验证实APS确能抑制灭活溶藻弧菌引起的PKM细胞焦亡。本研究有助于揭示APS在鱼类中发挥免疫调节作用的机制,并为APS在预防和控制鱼类细菌性疾病中的推广应用提供理论基础。

硫氧还蛋白(Trx)系统,包括NADPH、硫氧还蛋Protein Tyrosine Kinase抑制剂白还原购买PUN30119酶(TrxR)、Trx,是细胞调控氧化还原平衡的主要途径之一。TrxR是一种非常重要的含硒酶,其位于C端的-Gly-Cys-Sec-Gly活性位点非常容易被亲电试剂结合进而影响酶的生理活性,研究表明TrxR与肿瘤的增殖、侵袭、凋亡、耐药、复发和转移密切相关。因此,TrxR已成为肿瘤复发/转移和抗癌药物开发的重要靶点。TrxR的抑制导致依赖Trx系统的下游蛋白的活性下降,并减少对活性氧(ROS)的清除,最终导致氧化应激、细胞凋亡和坏死。鉴于历年来新药临床研究的高失败率,寻找现有药物的新适应症成为极具吸引力及优化药企成本/效益的新策略。“老药新用”由于可以快速简化新药研发过程,目前受到了更为广泛的关注。本论文基于“老药新用”策略,成功设计合成了两类TrxR小分子抑制剂,并对其潜在的作用机制进行了研究,具体内容如下:第一章:绪论部分主要概述了Trx系统的作用以及一些经典的TrxR抑制剂,此外,阐述了“老药新用”这一策略的优点以及其面临的挑战。第二章chemical biology:对乙酰氨基酚(APAP)类似物的合成及其抗肿瘤机制研究。首先,基于APAP结构进行化学修饰,合成了25个APAP衍生物。活性筛选得到对HeLa细胞毒性最大的具有两个Br原子取代基的化合物A8。之后采用一系列的生物实验对A8的作用机制进行了探究,实验结果显示A8能够抑制HeLa细胞内的TrxR活性,对TrxR有一定的靶向作用,并引起氧化应激,最终诱导HeLa细胞凋亡。该研究为APAP衍生物与TrxR之间的相互作用的后续研究提供了一定的基础。第三章:喹诺酮类似物的合成及其抗肿瘤机制研究。基于喹诺酮基本结构进行化学修饰,成功合成25种化合物。筛选出对HepG2细胞毒性最好的化合物B5。接下来对B5在细胞内可能的作用机制进行了探究,实验结果显示B5通过抑制HepG2细胞内的TrxR活性产生细胞毒性。进一步作用机制研究发现B5通过破坏细胞内氧化还原平衡引起氧化应激,最终诱导细胞凋亡。第四章:总结与展望。对全文进行总结,并对APAP和喹诺酮类药物进一步合成及生物应用前景进行展望。

红花(Carthamus tinctorius L.)是我国传统的药用及油料植物,类黄酮是红花花瓣的主要有效成分,具有多种药理作用,作为其经济价值的重要影响因素。红花作为一种喜干旱环境的植物,在夏季潮湿多雨季节地区的种植受到限制,从而导致其产量与质量受损,而提前或推迟红花的开花时间将在一定程度上解决这个问题。目前在许多植物中已经克隆出成花因子(FLOWERING LOCUS T)基因并研究了它们的功能,但在红花中却未见报道。因此,探究其开花与类黄酮合成的关系具有重要意义。本研究从红花PEBP基因家族中筛选并鉴定了三个FT基因,并进行生物信息学分析。通过在拟南芥中异源表达与红花中瞬时过表达CtFTs基因,检测其中相关基因的相对表达量和总黄酮含量,并进行相关蛋白质的互作验证来初步探究CtFTs的功能。主要研究结果如下:1.基于红花(吉红一号)基因组测序,筛选出7个PEBP基因。通过与拟南芥、水稻PEBP家族氨基酸序列构建系统进化树,结果显示有3个CtFT聚在FT-like亚家族,3个CtTFL1聚在TFL1-like亚家族,1个CtMFT聚在MFT-like亚家族。蛋白质二级结构分析显示:FT-like亚家族蛋白质全长174～176aa,p I为6.29～7.75,分子量为19681.24～19933.46Da;TFL1-like亚家族蛋白全长152～212aa,p I为4.76～9.16,分子量为17259.85～23811.78Da;CtMFT氨基酸序列全长151aa,p I为9.55,分子量为16987.44。除了CtTFL1-2为稳定蛋白,其他的6个PEBP蛋白都为不稳定蛋白,所有的CtPEBP蛋白都为亲水蛋白。亚细胞定位预测CtFT1、CtFT2、CtFT3、CtTFL1-1、CtMFT定位在细胞质中,CtTFL1-2、CtTFL1-3定位在微体中。基因结构与基序分析显示:CtFT1、CtFT2、CtFT3、CtTFL1-3具有4个外显子、3个内含子;CtTFL1-1、CtTFL1-2、CtMFT具有3个外显子,两个内含子;3个CtFTs具有相同的基序。启动子元件分析表明CtFTs编码区上游启动子顺式作用元件功能大多集中在响应外界胁迫的功能上,其中较为集中的是参与光响应的元件,CtFT3因具有4个响应脱落酸顺式作用元件,所以推测在响应外界激素上可能较其他两个基因更为特殊。在与拟南芥、水稻和大豆FT氨基酸多序列比对结果显示除了CtFT2的D-P-D-x-Hollow fiber bioreactorsP保守结构域的第一个天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N),CtFTs都具有PEBP家族保守结构域D-P-D-x-P、G-x-H-R,以及区别FT-like与TFL1-like亚家族的第85位关键氨基酸残基酪氨酸(Y),第144位关键氨基酸残基谷氨酰胺(Q),并且具有调控成花的保守结构域Segment B(LGRQTVYAPGWRQN),红花FT氨基酸序列中三联体(I/L)YN三联体中的第一位氨基酸为丙氨酸(A),可能暗示着CtFTs可能具有不同的功能。保守结构域分析表明,红花CtFT蛋白都具有典型的PEBP保守结构域。从红花叶片c DNA中克隆出CtFT1、CtFT2、CtFT3基因编码区序列。2.构建了pCAMBIA3301-CtFT1、pCAMBIA3301-CtFT2、pCAMBIA3301-CtFT3植物表达载体,转化农杆菌后通过浸花法侵染拟南芥,抗性筛选及PCR检测后获得了过表达CtFT1、CtFT2、CtFT3的T3代转基因拟南芥,与WT、ft突变体拟南芥相比:CtFT2可以促进拟南芥早花,而CtFT1与CtFT3则推迟拟南芥开花,且程度相近,但早于ft突变体。CtFT2转基因株系开花时莲座叶数量与WT相近,CtFT1、CtFT3株系则略多于WT,但ft拟南芥的莲座叶数量显著多于其他四个株系。CtFT2转基Smoothened Agonist供应商因拟南芥第一次开花时主茎高度略低于WT,CtFT1、CtFT3和ft株系主茎高度高于WT,从高至低依次为ft、CtFT1、CtFT3。CtFTs与成花激活复合体组成蛋白CtGRF5具有蛋白互作关系。过表达CtFT1、CtFT2基因对拟南芥类黄酮合成无明显影响,过表达CtFT3促进了拟南芥的类黄酮生物合成。3.不同光照条件下红花中CtFTs的表达模式表明CtFTs在长日照条件下表达量高于短日照,CtFT1表达模式与CtFT2具有较高的一致性,CtFT3在长短日照下表达量较低并且变化不显著。构建了p Green II 62-SK-CtFT1、p Green II 62-SK-CtFT1、p Green II62-SK-CtFT1表达载体,转化农杆菌后注射红花叶片进行瞬时过表达CtFTs基因,20天后与注射p Green II 62-SK空载体红花相比:CtFT1促进红花早花selleck NMR,而CtFT2与CtFT3则推迟红花开花。瞬时过表达CtFTs基因使红花叶片中总黄酮含量上升,且类黄酮生物合成途径关键酶基因表达量上调。

六价铬具有较强的生物毒性,对人体健康及生态系统的稳定构成了极大的危害。将六价铬转化为三价铬,是解决环境中铬污染的一种重要方法,其机理也是当前国内外学者关selleck合成注的焦点。然而,当前对六价铬还原反应的研究多局限于对还原反应的条件参数优化和还原酶位置的确定,对六价铬还原酶的功能及微生物的还原及抗性作用机理仍缺乏深入了解,也就不能准确、高效地控制和控制环境中的铬污染。本研究以筛选分离得到的Cr(Ⅵ)去除菌BC4为研究对象,首先探究了不同影响因子和外部电子供体对芽孢杆菌BC4去除六价铬的影响;再通过分析静息细胞、渗透细胞以及亚细胞组分的Cr(Ⅵ)去除能力确定芽孢杆菌BC4的去Cr(Ⅵ)部位,结合相对荧光定量PCR对Cr(Ⅵ)胁迫环境中菌株与Cr(Ⅵ)耐受和还原机制相关基因的表达水平变化,分析菌株的去铬机制。此后,通过特异基因的异源表达,鉴定特异基因所表达的蛋白对Cr(Ⅵ)的作用特性。主要结果如下:(1)从活性污泥中筛选出一株Cr(Ⅵ)去除细菌BC4,经过全基因组测序鉴定得知此细菌为蜡样芽孢杆菌。在p H8时,此菌能耐受500mg/L的Cr(Ⅵ),并具有较好的去Cr(Ⅵ)能力。(2)不同影响因素下去除六价铬的研究结果表明,菌株BC4antibiotic expectations去Cr(Ⅵ)的最适温度为37℃,最适宜p H为8,最适宜摇床转速为120rpm,对比研究表明,芽孢杆菌BC4对六价铬的去除不依赖于胞内外的代谢物质,而是依赖于菌体自身产生的活性物质,而且六价铬的去除不受限于六价铬的运输。通过对各亚细胞组分的Cr(Ⅵ)去除能力进行对比,可以看出菌株对Cr(Ⅵ)的去除几乎全部由胞外组分导致,这说明芽孢杆菌BC4的Cr(Ⅵ)去除过程是在胞外进行的,而且由胞外酶作用产生。(3)通过相对荧光定量PCR技术,对芽孢杆菌BC4的1个编码与Cr(Ⅵ)还原相关的硝基还原酶的基因nit R1和1个编码铬酸盐转运蛋白的基因chr A进行分析。结果显示,在100mg/L Cr(Ⅵ)胁迫下,chr A基因表达量是对照的1.45倍,nit R1基因表达量是对照的25倍,但300mg/L Cr(Ⅵ)条件下chr A基因表达量低于对照而nit R1基因表达量降为对照的4.93倍。基因序列分析表明Nit R1是芽孢杆菌BC4的一种NADPH依赖型铬还原酶。(4)构建了chr A、nit R1基因的异源表达工程菌株,结果显示,在Cr(Ⅵ)诱导下,chr A基因能够显著增强工程菌株的Cr(Ⅵ)耐受性,nit R1基因能够显著增强工程菌株的Cr(Ⅵ)还原能力,说明Chr A蛋白与BC4菌株的Cr(Ⅵ)耐受机制相关,Nit R1蛋白与BC4菌株的Cr(Ⅵ)还原机制相关寻找更多。本研究通过铬还原菌对Cr(Ⅵ)去除特性和还原、抗性机制的研究,可为微生物应用于治理环境铬污染提供理论依据。

新污染物的不断产生和发展对我们的生活产生了广Gel Doc Systems泛的影响。新污染物具有来源DS-3201使用方法广泛、治理复杂、隐蔽性、持久性等特点,其在环境和生物体内蓄积可能产生未知的健康风险。新污染物种类繁多,包含内分泌干扰物、抗生素、纳米材料以及消毒副产物(DBPs)等。新污染物能够通过多种途径被人体摄入,并引发一定的毒性效应,威胁人类的身体健康。MXene是一种应用前景广阔的材料,但与其相关的健康风险研究却相对匮乏。而且随着检测技术的快速更新换代,新的DBPs不断被识别发现,其相关的健康风险研究也亟待开展。所以本研究聚焦新污染物当中的二维纳米材料MXene和DBPs,利用体外细胞模型对它们的细胞毒性及致毒机制进行了深入探讨。MXene材料作为一种相对较新的纳米材料,由于其Etoposide小鼠高机械强度、较好的生物相容性、高表面积、稳定的电化学性质和高亲水性等特性,一经开发便引起了研究者们的广泛兴趣。目前已知的具有不同结构组成的MXene材料已有130多种,其在光电子学、电磁干扰屏蔽、能量存储、生物医学以及环境工程等领域展现出巨大的应用潜力。老化是MXene在环境中的一种重要行为,探究老化过程对MXene毒性的影响对于明确其环境健康风险十分重要。基于此,我们采用FHC细胞模型对老化前(Ti_3C_2T_x、Ti_3CNT_x)后(o-Ti_3C_2T_x、o-Ti_3CNT_x)MXene的毒性效应进行了对比研究。首先,我们对材料老化前后的物化性质进行了系统表征分析,明确了老化过程对两种不同组成的MXene材料尺寸、形貌和化学组成等理化性质的影响。另外,四种材料的毒性评价结果显示,在0-100μg/m L的暴露剂量范围内,相对于老化后,Ti_3C_2T_x和Ti_3CNT_x均表现出更强的细胞毒性。通过荧光染色,抑制剂对比实验以及流式细胞术等方法,我们明确了诱导细胞凋亡是Ti_3CNT_x导致细胞活力降低的主要原因。我们继续采用细胞电镜观察、q-PCR、Western blot等方法证实细胞摄入的Ti_3CNT_x可引起细胞内ROS和GSH明显升高,导致细胞诱发Bcl-2或者线粒体介导的内源性细胞凋亡,进而导致细胞总体活力降低。综上所述,MXene的类型和老化均是影响其细胞毒性的关键因素。DBPs是饮用水消毒处理过程中重要的产物,是新污染物的重要组成部分。目前,新的DBPs不断被识别发现,其中大部分物质的健康风险仍未可知,且没有得到有效监管。令人担忧的是,之前的一些研究显示部分DBPs可能具有较高的致毒风险,所以关键致毒DBPs的有效识别对保障人们用水安全至关重要。基于此,我们以广州某水厂不同处理工艺段水样为研究对象,分别采集原水(W1)、待滤水(W2)、砂滤水(W3)、炭滤水(W4)、出厂水(W5)、管网水(W6),综合分析水样的非靶标检测和细胞DNA损伤效应测试结果,对不同处理工艺段水样中的关键致毒DBPs组分进行了系统的分析和识别。首先,我们通过富集的手段大大提高了水样DBPs的检出效率,之后通过UPLC-MS的方法对各个水样水质进行非靶标检测,并分析水处理工艺过程中的水质的动态变化。细胞效应研究结果表明,只有W1、W2、W3水样对FHC细胞表现出明显的综合细胞毒性,且毒性效应依次增强。在细胞DNA损伤能力方面,W1>W3>W6>W5>W4,W2没有显示出DNA损伤诱导能力。基于以上结果,我们对水样的水质分析结果和细胞效应结果进行综合分析,快速筛选出一部分可疑致毒DBPs清单,并对清单物质在水处理工艺过程中的相对含量变化进行了直观描述。该工作加强了我们对DBPs潜在健康风险的认识,为饮用水中关键致毒DBPs组分的科学监管及针对性水处理工艺的优化提供了理论参考。总体来讲,本研究聚焦典型新污染物MXene和DBPs的健康风险研究,揭示了MXene的细胞毒性机制以及其关键影响因素,建立了细胞DNA损伤效应终点导向的可疑致毒DBPs筛选方法,为MXene的安全应用以及保障用水安全提供了理论支持,充实了新污染物的健康风险研究理论体系。

研究背景和目的脓毒症是感染反应失调引起的危重疾病,可以导10致危及生命的器官功能障碍,是重症监护室(Intensive Care Unit,ICU)内患者死亡的主要原因之一。现有的脓毒症诊断标准复杂耗时,尚未发现具有独立诊断能力的生物标志物。本实验室前期研究显示脂肪因子Meteorin-like(METRNL)与脓毒症密切相关,本课题将从整体动物水平和临床患者水平研究METRNL作为脓毒症诊断与病情预测标志物的潜能,并初步探究METRNL的分泌机制,以期发现新的脓毒症候选标志物,为临床提供脓毒症的诊疗依据,为阐明脓毒症的发病机制提供新的思路。研究方法1.利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射和盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)两种动物脓毒症模型,探索小鼠血清Metrnl的变化规律,在整体动物水平探索血清Metrnl作为脓毒症诊断与病情预测标志物的潜能。2.纳入现行经典脓毒症参考指标降钙素原(Procalcitonin,PCT)和C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)评估METRNL对术后脓毒症患者的诊断与病情预测潜能。首先探索对照组患者手术前后血清METRNL的差异,而后将对照组样本与术后脓毒症患者首次样本的血清METRNL、PCT、CRP进行比较,分别绘制受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC曲线)并得出曲线下面积(Area Under ROC Curve,AUC),根据约登指数得出截断值及相应敏感性和特异性,再将所有术后脓毒症样本的METRNL、PCT、CRP与代表脓毒症严重程度的贯序器官衰竭评估(Sequential Organ Failure Assessment,SOFA)评分进行整体相关性分析,之后进行术后脓毒症患者的个体化相关性分析,最后对血清METRNL、PCT、CRP与术后脓毒症患者28天生存情况进行Logistic回归分析。3.纳入现行经典脓毒症参考指标PCT和CRP评估METRNL对ICU内脓毒症患者的诊断与病情预测潜能。首先将对照组患者与ICU内脓毒症患者的血清METRNL、PCT、CRP进行比较,分别绘制ROC曲线并得出AUC,根据约登指数得出截断值及相应敏感性和特异性,再将ICU内脓毒症样本的METRNL、PCT、CRP与SOFA评分进行相关性分析,最后对血清METRNL、PCT、CRP与ICU内脓毒症患者28天生存情况进行Logistic回归分析。4.初步探索METRNL的分泌机制。利用LPS腹腔注射和CLP两种造模方式对内皮细胞特异性Metrnl基因敲除(endothelial cell-specific Metrnl gene knockout mice,EC-Metrnl~(-/-))小鼠及同窝野生型(wild type,WT)小鼠造模,探索生理及脓毒症状态下小鼠血清Metrnl的主要组织来源。利用LPS探索脓毒症状态下原代人脐静脉内皮细胞(HumanColforsin配制 umbilical vein endothelial cell,HUVECs)上清液METRNL的变化规律及胞内METRNL m RNA表达情况。使用特异性阻断分泌蛋白由内质网向高尔基体转运的阻断剂Brefeldin A,和特异性阻断内质网膜转运通道构建的Eeyarestatin 1,在生理状态和脓毒症状态下探索METRNL的细胞水平Bionanocomposite film分泌途径。研究结果1.LPS腹腔注射诱导的脓毒症模型造模2 h后,LPS给药剂量为10~(-2)mg/kg、10~(-1)mg/kg、1 mg/kg、10 mg/kg的实验组小鼠血清Metrnl显著高于对照组小鼠,实验组小鼠血清Metrnl存在随着LPS剂量的增加而不断升高的量效关系。浓度低至10~(-4)mg/kg的LPS腹腔注射即可引起小鼠血清Metrnl显著升高。1 mg/kg的LPS腹腔注射造模1 h后,实验组小鼠血清Metrnl即出现显著升高,实验组小鼠血清Metrnl存在随着造模时间延长而升高的时效关系。1 mg/kg的LPS腹腔注射造模0.5 h后,实验组小鼠血清Metrnl未出现显著升高。CLP诱导的脓毒症模型造模2 h、6 h、12 h、24h、48 h后所有实验组小鼠血清Metrnl显著高于相应假手术组小鼠,实验组小鼠血清Metrnl存在随着造模时间延长而不断升高的时效关系。2.大型腹部外科手术轻度升高血清METRNL。血清METRNL诊断术后脓毒症的AUC略逊色于PCT但优于CRP(AUC=0.958:0.997:0.882)。术后脓毒症患者血清METRNL与SOFA评分相关(肯德尔检验相关系数0.577,P<0.01;斯皮尔曼检验相关系数0.759,P<0.01),PCT与SOFA评分相关(肯德尔检验相关系数0.407,P<0.01;斯皮尔曼检验相关系数0.504,P<0.01),CRP与SOFA评分无相关性。个体化相关性分析中,所有患者血清METRNL和PCT均与SOFA评分相关,有2名患者的血清CRP与SOFAJQ1小鼠评分相关。血清METRNL对术后脓毒症患者28天生存情况的影响具有统计学意义(优势比1.009,95%置信区间1.002-1.016,P=0.0135),血清PCT和CRP对术后脓毒症患者28天生存情况的影响不具有统计学意义。3.血清METRNL诊断ICU内脓毒症的AUC略逊色于PCT但优于CRP(AUC=0.973:0.99:0.926)。ICU内脓毒症患者血清METRNL与SOFA评分相关(肯德尔检验相关系数0.701,P<0.01;斯皮尔曼检验相关系数0.856,P<0.01),PCT与SOFA评分相关(肯德尔检验相关系数0.302,P<0.05;斯皮尔曼检验相关系数0.504,P<0.05),CRP与SOFA评分无相关性。血清METRNL对ICU内脓毒症患者28天生存情况的影响具有统计学意义(优势比1.007,95%置信区间1.002-1.012,P<0.001),血清PCT和CRP对ICU内脓毒症患者28天生存情况的影响不具有统计学意义。4.生理盐水腹腔注射EC-Metrnl~(-/-)小鼠及WT小鼠2 h后,EC-Metrnl~(-/-)小鼠血清Metrnl低于酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)试剂盒检测下限,其水平显著低于WT小鼠。1 mg/kg的LPS腹腔注射EC-Metrnl~(-/-)小鼠及WT小鼠2 h后,EC-Metrnl~(-/-)小鼠血清Metrnl约为WT小鼠的18%。腹腔注射LPS的EC-Metrnl~(-/-)小鼠血清Metrnl高于腹腔注射生理盐水的EC-Metrnl~(-/-)小鼠。CLP模型假手术处理EC-Metrnl~(-/-)小鼠及WT小鼠造模24 h后,EC-Metrnl~(-/-)小鼠血清Metrnl约为WT小鼠的10%。CLP处理的EC-Metrnl~(-/-)小鼠及WT小鼠造模24 h后,EC-Metrnl~(-/-)小鼠血清Metrnl约为WT小鼠的6%。CLP处理的EC-Metrnl~(-/-)小鼠血清Metrnl高于假手术处理的EC-Metrnl~(-/-)小鼠。5.LPS孵育HUVECs 2 h后,LPS浓度为10~(-3)μg/m L、10~(-2)μg/m L、10~(-1)μg/m L、1μg/m L、10μg/m L的实验组HUVECs上清液METRNL显著高于对照组,实验组上清液METRNL存在随着LPS浓度增加而不断升高的量效关系。1μg/m L的LPS孵育HUVECs 0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h后,所有实验组HUVECs上清液METRNL均高于相应对照组,实验组细胞上清液METRNL存在随着造模时间延长而升高的时效关系。各实验组与相应对照组间的METRNL m RNA表达无统计学差异,各实验组间的METRNL m RNA表达也无统计学差异。生理状态的分泌途径研究中,Brefeldin A组细胞的上清液METRNL约为空白对照组和溶剂对照组的10%,Eeyarestatin 1组细胞的上清液METRNL约为空白对照组和溶剂对照组的20%。去除Brefeldin A的阻断后其METRNL恢复至正常。脓毒症状态的分泌途径研究中,LPS+Brefeldin A组上清液METRNL约为LPS组的8%。研究结论1.整体动物实验提示,血清Metrnl具有对脓毒症的早期诊断潜能和病情预测潜能。2.大型腹部外科手术是影响血清METRNL的独立因素。METRNL对术后脓毒症患者和ICU内脓毒症均有较好的诊断潜能和病情预测潜能,可作为脓毒症的候选生物标志物。3.生理和脓毒症状态下的血清Metrnl主要来源于血管内皮,其分泌机制可能通过内质网-高尔基体途径介导。脓毒症状态下升高的METRNL主要来自于已合成蛋白的分泌。

目的 探讨藁本内酯对骨肉瘤细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法 DMEM培养基培养骨肉瘤MG-63细胞，采用细胞毒性实验观察藁本内酯对MG-63细胞增殖的影响；细胞划痕实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞迁移的影响；流式细胞仪检测不同浓度clathrin-mediated endocytosis藁本内酯对骨肉瘤细MRTX849化学结构胞周期的影响。明确藁本内酯作用MG-63细胞的浓度，将细胞分为对照组、顺铂（DDP）组，藁本内酯联合顺铂（DDP+LIG）组，顺铂联合自噬抑制剂（DDP+3MA）组。Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白LC3B、Beclin1、Bcl-2、Bax，细Entinostat胞色素C以及通路蛋白ULK1、ATG3的表达情况。免疫荧光检测各组细胞LC3B蛋白的表达情况。结果 与对照组比较，20、40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞增殖均被抑制（均P <0.05）；与对照组比较，160μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞迁移能力显著降低（P <0.01）。与对照组比较，40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞G2/M期细胞均显著阻滞（均P <0.05）。与DDP组比较，DDP+LIG组Bax表达升高（P <0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（P <0.05），细胞色素C表达升高（P <0.05），自噬蛋白LC3B、Beclin1，通路蛋白ULK1、ATG3表达均降低（均P <0.05）；与DDP组比较，DDP+3MA组自噬荧光体数量减少。结论 藁本内酯能够抑制骨肉瘤细胞增殖，降低细胞迁移能力，导致骨肉瘤细胞G2/M期阻滞。与单独使用顺铂比较，藁本内酯联合顺铂可使骨肉瘤细胞凋亡明显增加，其作用机制可能是通过抑制自噬ULK1/ATG3信号通路实现的。

目的 探讨对伴有失眠的抑郁症患者实施针对性护理干预的临床效果。方法 选取本院202acute otitis media0年4月～2022年4月收治的80例伴有失眠的抑郁症患者作为研究对象，采用抑郁自评量表（SDS）、匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）和纽卡斯尔护理服务满意度量表（NSNS）对患者进行测评，Decitabine供应商按照双色球随机分组法将患者分为对照组（40例，开展常规护理干预）与实验组（40例，开展针对性护理干预），比较两组患者护理前后的抑郁情绪、睡眠质量、相关神经递质指标和护理满意度。正态计量资料采用t检验，计数资料采用x~2检验。结果 实验组患者护理后SDS评分22.43±3.51分，PSQI评分8.73±1.41分，去甲肾上腺素70.13±3.36 ng/L、多巴胺225.26±14.11 ug/L、5-羟色胺358.15±12.42 ug/L以及护理满意度（100.00%）均显著优于对照组（P<0.05）。结论 针对性护理干预可显著改善伴有失眠的抑郁症患者的抑郁情绪以及睡眠质量，有利于神经递质正常代谢功能的恢复，具有较高的BLZ945化学结构护理满意度。

目的：研究中药热罨包治疗产后子宫收缩痛的效果及对睡眠质量的影响分析。方法：选取2022年9月至2023年6月龙岩人民医院收治的产后子宫收缩痛产妇200例作为研究对象，按照分娩先后顺序分成对照组和lymphocyte biology: trafficking观察组，每组100例。对照组给予常规治疗，观察NN2211试剂组在常规治疗基础上+中药热罨包，比较2组产妇治疗效果、治疗满意度以及睡眠质量。结果：治疗后，观察组患者的治疗有效率为94%,高于对照组的56%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组满意度为99%,高于对照组的75%,差异有统计学意义(P<Trichostatin A体内实验剂量0.05);观察组治疗后的匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：中药热罨包能有效治疗产后子宫宫缩痛，减少疼痛，提高母乳喂养成功率，从而提高产妇满意度。因此，中药热罨包利于产妇子宫收缩痛减轻及产后恢复，同时可以有效提升产后的睡眠质量，可推广应用。