S6 kinase 信号通路

目的 探讨毛囊单位提取移植术(FUE)联合富血小板血浆(PRP)治疗继发性瘢痕秃发的临床效果。方法 采用回顾性研究,将在选取2017年6月-2019年6月在滨州医学院附属医院美容医学部就诊的仅行毛囊单位移植术的继发性瘢痕秃发患者30例纳入FUE组,将2019年8月-2021年8月在滨州医学院附属医院美容医学部就诊行毛囊移植术+富血小板血浆(术前2h及术后30d-180d使用)的30例继发性瘢痕秃发患者纳入FUE+PRP组。观察2组患者术后3、6、12个月毛发成活率、患者12个月术后满意率及患者12个月内植发区不良反应发生率。结果 术后3、6、12个月,FUE+PRP组患者成活率分别为(35.7±1.8)%、(79.4±2.5)%、(90.4±2.3)%,明显高于单纯FUE组(25.1±1.9)%、(71.5±2.5)%、GW-572016供应商(83.5±1.8)%。术后12个月,单纯FUE组患者非常满意10例,满意13例,不满意7例。FUE+PRP组skin immunity患者非常满意21例,满意7例,不满意2例。FUE组患者满意率76.7%,FUE+PRP组患者满意率93.3%(P<0.05)。术后12个月内FUE联合PRP治疗组患者植发区皮肤坏死、毛囊炎发生率低于单纯FUE治疗组。但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 与单纯的行FUE移植术相比,FUE联合富血小板血浆能有效提高继发性瘢痕秃发患者行FUE移植术后毛发的成活率及患者的满意率,有利于继寻找更多发性瘢痕秃发的治疗。

禽白血病病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)是家禽中常见的三种免疫抑制性病原,均可以通过种源垂直传播。鸡群中多种免疫抑制病毒的混合感染非常普遍,其中ALV-J与REV、ALV-J与CIAV的共感染均有报道,但REV或CIAV与ALV-J通过垂直传播形成共感染后的致病性观察缺乏系统的研究,在此过程中REV或CIAV共感染对ALV-J净化检测的影响也是值得关注的问题。为此,本研究通过鸡胚接种方式构建REV或CIAV分别与ALV-J共感染的雏鸡模型,通过孵化率、死亡率、体重、胎粪ALV-p27抗原检出率、病毒血症阳性率等指标分析了REV或CIAV在垂直传播中与ALV-J共感染对ALV-J致病性和净化检测的影响。本研究选择了ALV-J NX0101株、REV LN1201株、CIAV LY08株三种毒株进行扩增定量,7胚龄时卵黄囊接种孵化后分别构建了REV与ALV-J、CIAV与ALV-J共感染模型,观察和比较了各病毒单独感染与共感染组孵化率、雏鸡死亡率等影响。结果显示,ALV-J+REV组和ALV-J+CIAV组的孵化率分别为68.57%和62.86%,均低于各单感染组和Mock组(85.71%)。生存曲线显示,两种病毒与ALV-J共感染的死亡率均高于各病毒单感染组和Mock组。对不同日龄各组鸡只的体重进行称重记录,7日龄时Mock组平均体重为59.25 g,ALV-J、REV、CIAV组的体重分别为50.83 g、49.67 g、45.32 g,而ALV-J和REV组43.78 g、ALV-J和CIAV组44.27 g,显示共感染加重了对生长的抑制。分别在1d、3d、7d、14d对鸡只采集血浆接种DF-1细胞进行ALV病毒分离,细胞培养上清ALV-p27抗原检测结果显示,ALV-J组、ALV-J+REV组、ALV-J+CIAV组阳性率在各日龄均为100%,Mock组均为0%。分别在1d、3d、7d、14d对鸡只采集肛拭子并检测ALV-p27抗原,ALV-J组阳性率各日龄分别为92.86%、90.90%、88.89%、93.33%,ALV-J+REV组为91.30%、93.75%、90.90%和100%,ALV-J+CIAV组为91.67%、89.47%、90.90%、100%。结果显示肛拭子的ALV-J p27阳性检出率会低于血浆病毒分离。分别在1d、7d、14d对各组鸡只剖杀三只,采集脾脏、胸腺、法氏囊进行称重并计算免疫器官指数。对于REV和CIAV分别与ALV-J垂直传播共感染实验结果分析显示,ALV-J+REV组7d时脾脏器官指数与Mock组、ALV-J组相比显著降低(p<0.05),ALV-J+CIAV组7d时脾脏器官指数与Mock组相比显著降低(p<0.001),与CIAV组相比显著降低(p<0.05),与ALV-J组相比极著降低(p<0.01);ALV-J+Precision immunotherapyREV组胸腺器官指数与REV组、ALV-J组相比显著降低(p<0.05),与Mock组相比极显著降低(p<0.01),ALV-J+CIAV组胸腺器官指数与Mock组、ALV-J组相比明显降低(p<0.001),与CIAV组相比差异不明显;ALV-J+REV组法氏囊器官指数与REV组相比显著降低(p<0.05),ALV-J+CIAV组法氏囊器官指数与Mock组、ALV-J相比明显降低(p<0.001),与CIAV组相比差异不明显。在1d、3d、7d、14d时采集血浆,检测各组脾脏、胸腺、法氏囊的病毒载量,结果显示,三种免疫器官ALV-J+REV组和ALVJ+CIAV组的ALV-J病毒载量均高于ALV-J单感染组,ALV-J+REV组REV病毒载量高VE-822细胞培养于REV组,ALV-J+CIAV组获悉更多CIAV病毒载量高于CIAV组,表明REV、CIAV分别与ALV-J共感染后均促进了ALV-J在免疫器官中的增殖,同时ALV-J也促进了REV、CIAV在免疫器官中的增殖。综上所述,ALV-J与REV垂直传播共感染、ALV-J与CIAV垂直传播共感染均会造成孵化率降低,病鸡生长迟缓,死亡率升高,抑制中枢免疫器官发育,协同促进两种病毒之间的复制,增加了ALV-J净化检测的难度。提示在对ALV-J进行种源净化的同时,也要加强对于REV、CIAV等禽类免疫抑制病的检测淘汰,进行多病原协同净化,减少养禽业的经济损失。

在利用重离子诱变结合M_1TDS技术，培育出低镉型臻两优8612（国家镉低积累品种区试中的名称为“莲两优1号”，以下简称“莲两优1号”）基础上，2021—dryness and biodiversity2022年进行多点试验。结果表明：莲两优1PF-03084014研究购买号具有稳定的镉低积累特性，在轻中度镉污染大田种植，稻米镉（Cd）不超标；锰（Mn）的吸收下降对其生长和产量没有明显影响；当土壤有效磷（P）极端缺乏时selleck合成，莲两优1号在黄熟期开始出现叶尖落色变化，但其产量与对照差异不大。基于研究结果提出，推广OsNRAMP5基因突变型镉低积累水稻品种，首先要进行测土分析，选择轻中度镉污染大田（土壤总Cd含量≤1.5 mg/kg）种植；在水稻生长中后期，特别是对有效磷严重缺乏的田块，应结合病虫害防治喷施磷酸二氢钾，以促进壮籽增产；除种子公司提供高纯度种子和大田生产要注意田间除杂外，即便是镉低积累常规稻品种，也不建议农户自留种，以免因种子纯度问题造成稻谷Cd超标。

目的：探究重症急性肾损伤（AKI）患者连续性肾脏替代疗法（CRRT）中应用那屈肝素钙与枸橼酸钠两种抗凝方法对临床效果的影响。方法：回顾性分析2020年1月至2021年12月宜春市人民医院收治的70例CRRT重症AKI患者的临床资料，根据治疗方法的不同分成那屈肝素钙组medical group chat（30例）和枸橼酸钠组（40例）。比较两组患者抗凝效果、凝血功能[活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、D–二聚体（D–D）]、肾功能[尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、肌酐清除率（Ccr）]、并发症发生情况。结果：观察组患者抗凝有效率高于对照组，差异具有统计学意义（P <0.05）。治疗后，两组患者APTT低于治疗前，FIB、D–D高于治疗前；枸橼酸钠组患者APTT高于那屈肝素钙组，FIB、D–D低于那屈肝selleck化学素钙组，差异具有统计学意义（P <0.05）。治疗后，两组患者Scr、BUN低于治疗前，Ccr高于治疗前；枸橼酸钠组患者Scr、BUN低于那屈肝素钙组，Ccr高于那屈肝素钙组，差异具有统计学意义（P <0.05）。观察组患者出血事件发生率低于对照组，差异PF-6463922研究购买具有统计学意义（P <0.05）。结论：枸橼酸钠抗凝相比于那屈肝素钙抗凝在重症AKI患者CRRT治疗中的效果更加显著，更有利于改善凝血功能，促进肾功能恢复，减少出血事件的发生。

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在植物生长发育与逆境应答过程中具有重要作用。为探究小麦MAPK基microbe-mediated mineralization因在植物生长发育中的作用，利用生物信息学分析其编码蛋白的序列和结构，发现该基因编码的蛋白含有一个保守的催化丝氨酸/苏氨酸磷酸化的激酶结构域，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。系统进化分析结果表明，小麦MAPK基因与拟南芥MAPK1为直系同源基因，故将其命名为TaMAPK1。进一步通过转基因方法创建了以野生型拟南芥Col-0为背景的TaMAPK1过表selleck Vorinostat达株系(TaMAPK1-OE)和以拟南芥AtMAPK1基因功能缺失纯合突变体mapk1为遗传背景的TaMAPK1回补系(TaMAPK1-cEmricasan体内实验剂量om),并对其进行表型观察和产量性状调查，结果发现，突变体mapk1的抽薹时间比Col-0提前2.8 d,TaMAPK1-com的抽薹时间与Col-0无显著变化；与Col-0相比，突变体mapk1的株高、总分枝数、种子大小、单株种子重量和单株生物量均显著提高，而TaMAPK1-com和TaMAPK1-OE株系的种子大小、单株和种子重量和单株生物量均显著减少。

大豆含有丰富的蛋白质、油脂和生物活性成分,但大豆又是主要的过敏食物。众所周知,人们摄取大豆制品时,大豆过敏蛋白伴随着食物中其他营养组分进入机体。许多文献报道,补充多酚黄酮类生物活性物质或将其与过敏原蛋白结合也许能成为消减过敏蛋白致敏性的新策略。大豆异黄酮作为抗过敏成分与大豆过敏蛋白处于同一体系,在加工过程中两者可能形成结合物,但大豆异黄酮是以结合状态(与过敏蛋白结合)还是游离状态影响过敏蛋白致敏性仍是亟待解决的科学问题。本论文以大豆活性异黄酮(染料木素Gen、大豆苷元Dai、黄豆黄素Gly)与大豆过敏蛋白(7S和11S)的结合物和混合物为研究对象,首先从细胞水平初步评估结合物和混合物的致敏性;再通过模拟婴幼儿胃肠体外消化探索它们的消化稳定性,并从细胞水平评估消化产物致敏性;最后,建立BALB/c小鼠致敏激发模型,从动物水平评价大豆异黄酮对大豆蛋白致敏性影响。通过综合评估结合物和混合物在细胞和动物水平的过敏反应,揭示了大豆活性异黄酮形态(与蛋白结合或游离)对7S或11S蛋白的影响机制,为科学认知大豆基质中过敏蛋白的致敏性提供理论指导。研究的主要方法、结果和结论如下:(1)制备六种大豆过敏蛋白-活性异黄酮碱性结合物及其相应的混合物。构建7S或11S蛋白诱导的KU812PEDV infection细胞脱颗粒模型,初步探究大豆异黄酮对大豆蛋白致敏性的影响。通过检测生物活性介质,发现结合或游离的大豆异MG132小鼠黄酮对7S/11S诱导释放β-HEX、组胺和IL-6的影响没有规律,但均能抑制IL-4释放;并从结合物中选出致敏性较低的7S-Gly、11S-Dai以供后续研究。进一步利用流式细胞术检测KU812细胞活化脱颗粒相关信号蛋白表达情况,结果表明大豆蛋白诱导细胞脱颗粒受到Lyn、MAPK和NF-κB信号通路的调控,且结合和游离的异黄酮都均能显著抑制JNK蛋白的表达。(2)通过体外模拟婴幼儿胃肠消化结合物和混合物,研究它们的消化稳定性,并利用KU812细胞脱颗粒模型评估消化产物致敏性。Tricine-SDS-PAGE结果显示,结合的异黄酮不影响11S蛋白的耐消化性,但会促进7S蛋白α亚基消化,游离的异黄酮对7S和11S蛋白的消化性基本没有影响。KU812脱颗粒结果显示,原蛋白、结合物及混合物的消化产物仍保留较强的致敏性,细胞脱颗粒后释放较高水平的β-Hex、组胺、IL-6和IL-4,且总体差异不大,说明异黄酮对大豆蛋白消化产物致敏性的影响不显著。(3)以7S-Gly和11S-Dai及其对应混合物为研究对象,构建BALB/c小鼠致敏激发模型,通过体液免疫和细胞免疫等方面综合评价结合物和混合物的致敏性。结果显示原蛋白组和结合物组小鼠血清中特异性抗体(IgE、IgG、IgG_1和IgG_(2a))和肥大细胞蛋白酶(mouse mast cell protease-1,mMCP-1)水平比混合物组有所升高;此外,观察到各组小鼠脾脏中的DC细胞比例无显著差异,结合和游离的异黄酮均能诱导Th1/Th2平衡向Th1方向偏移,并促进Tregs比例升高。综合各项致敏性指标可知,游离异黄酮能缓解7S和11S蛋白引起的全身性过敏反应,而结合的异黄酮只能缓解细胞免疫反应。(4)分离小鼠肠道组织和盲肠内容物,利用HE染色观察小鼠肠Naporafenib分子量道组织变化,检测血清中D-乳酸和二胺氧化酶,通过流式细胞术鉴定了小鼠MLN中免疫细胞的分化情况,同时检测了小鼠盲肠内容物中的肠道菌群。结果表明:结合和游离的异黄酮能缓解过敏引起的肠道损伤;通过促进Tregs的分化和调节Th1/Th2平衡来消减7S或11S蛋白的致敏性,且游离的异黄酮还能抑制MLN中DC比例以及缓解7S蛋白引起的Th17/Tregs失衡;大豆异黄酮还能通过上调F/B比例、增加梭菌目丰度和降低拟杆菌目丰度,来逆转过敏引起的肠道菌群失衡,并且结合的异黄酮比游离异黄酮效果更好。

<正>免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)是一种获得性自身免疫性出血性疾病，以血小板破坏增加和/或生成减少为特征。成人原发性ITP的治疗遵循个性化原则，提升血小板计数至安全水平，减少出血事件。目前治疗分为一、二线治疗，一线治疗主要包括皮质类固醇及免疫球蛋白，但复发率高达70%，临床上建议转入二线治疗。二线治疗旨在帮助患者获得长期的缓解，艾曲泊帕(Eltrombopag)作为一种口服的促血小板bioactive substance accumulation生成素受体激动剂(thrombopoietin receptor agonist,TPO-RA)，可诱导巨核细胞增殖分化，刺激血小板selleck抑制剂生成，1～2周起效，有效率达80%以上，主要不良反应包括头痛、恶心、呕吐、转氨酶升高，部分患者会出现骨髓网硬蛋白沉积、骨髓纤维化~([1])，因而已成为成人ITP的二线治疗。本文报道艾曲泊帕致动静脉R428血栓1例并复习文献。

糖苷酶(Glycoside hydrolases,GHs)可催化糖苷的水解或转苷反应,其催化转苷反应时不依赖磷酸化糖,因此可在体外实现糖苷的酶法合成。然而,大部分GHs同时催化水解和转苷反应,由于水解反应的存在,糖苷产物得率普遍不高。因此,研究GHs的水解和转苷反应的选择性机制,实现定向转苷,对糖苷合成具有重要意义。此外,因为糖苷键的类型对糖的结构与功能起决定作用,GHs催化转苷反应时的糖苷键类型的选择性,亦是糖苷合成的重要研究内容。GHs催化水解或转苷反应时会生成一种糖-酶结合过渡态(TS)结构,该结构的自由能垒高低可决定GHs水解/转苷的偏好性,然而TS结构难以通过实验捕获,TS结构的确定是GHs水解/转苷机制研究的难点和关键点。多尺度理论模拟可对GHs催化反应机理进行建模从而获得关键TS结构。α-糖苷酶在食品加工领域应用广泛,但目前的机制研究主要集中在β-糖苷酶,对α-糖苷酶的机理研究较少。本论文采用多尺度理论模拟方法对α-糖苷酶中有代表性的GH29家族的Lactobacillu此网站s casei来源岩藻糖苷酶Alf C的水解偏好性机理、GH77家族Thermus aquaticus来源的淀粉麦芽糖酶Ta AM的转苷偏好性机理进行解析,在此基础上根据影响水解与转苷偏好性的关键位点分布特征,对蔗糖水解酶和淀粉蔗糖酶进行分子改造实现了的水解/转苷定向调控,并通过多尺度理论模拟对其选择性机制进行解析。此外,还对Limosilactobacillus reuteri 121来源的4,6-α-葡聚糖转移酶Lr Gtf B的转苷键型的偏好性机理进行解析。主要研究结果如下:(1)GH29家族岩藻糖苷酶Alf C的水解偏好性机理研究。针对酸碱催化剂构象未被正确定位的问题,采用加速分子动力学模拟对酸碱候选残基D242所在loop进行构象采样,确定D242为酸碱催化剂,并捕获其可催化构象。QM/MM元动力学模拟结果表明Alf C糖基化反应,水解反应和转苷反应的自由能垒分别为16.1 kcal·mol~(-1)、9.8 kcal·mol~(-1)和11.4 kcal·mol~(-1),故Alf C为水解偏好性GHs。此外,还确定了三者的构象路线分别为~1C_4→[~3H_4]~(?)→~1C_4、~3S_1/~3H_4→[~3H_4/E_4]~(?)→~1C_4和~3S_1/~3H_4→[E_4]~(?)→~1C_4。通过分析水解和转苷反应TS结构,发现转苷TS结构D242的羧基O_(δ2)原子与受体糖环的O5原子的距离比水解反应中更近,两者之间具有静电排斥作用,这是Alf C水解偏好性的关键因素,从而导致转苷反应自由能垒比水解反应的高。(2)GH77家族淀粉麦芽糖酶Ta AM转苷偏好性机理研究。针对糖链距离酸碱残基E340远,质子转移不清晰及后续催化的问题,提出由250s loop介导的构象开关模型。路径-元动力学模拟表明糖链存在与否会使250s loop分别处于关闭(C)和开放构象(O),且C构象比O构象的能量高4.0 kcal·mol~(-1)。250s loop处于C构象时可诱导糖链发生滑动,使糖苷氧原子靠近酸碱残基E340催化糖基化反应,总自由能垒为12.9 kcal·mol~(-1)。此外,250s loop在水解和转苷时分别处于部分关闭(PC)和C构象。QM/MM元动力学结果表明水解和转苷反应的自由能垒分别为18.0 kcal·mol~(-1)和9.0 kcal·mol~(-1)。因此,转苷的整体能垒比水解低5.1 kcal·mol~(-1),与转苷/水解比5000:1的实验结果一致。分析水解和转苷反应TS结构发现,由于转苷反应的250s loop处于C态,活性位点的堆积比较紧密,TS比较稳定;而水解反应的250s loop处于PC态,活性位点堆积比较松散,TS不稳定。因此构象动力学诱导的过渡态能量差异是Ta AM为转苷偏好性GHs的重要因素,这与250s loop周围残基突变导致歧化/水解比值降低的实验结果一致。(3)GH13家族蔗糖水解酶SHs和淀粉蔗糖酶ASs水解和转苷的定向调控。蔗糖水解酶SHs和淀粉蔗糖酶ASs是GH13家族中序列、结构相似的两类酶,分别偏好水解和转苷反应。根据揭示的GHs水解与转苷偏好性关键位点分布特征,通过序列比对和结构分析发现两种酶亲核残基D邻位存在保守的氨基酸S(位于SHs)和A(位于ASs)。在两类酶中分别选取Xanthomonas axonopodus来源的Xa SH、Caulobacter crescentus来源的Cc SH和Neisseria polysaccharea来源的Np AS、Deinococcus geothermalis来源的Dg AS进行定点突变研究。Xa SH_(S281A)和Cc SH_(S271A)的T/H(转苷/水解产物比)由野生型的0.05和0.07分别增加到1.4和1.11,Np AS_(A287S)和Dg AS_(A285S)的T/H比由野生型的8.80和7.13分别下降到0.15和0.20,动力学数据亦表明,Xa SH_(S281A)和Cc SH_(S271A)由野生型的水解偏好变为转苷偏好,Np AS_(A287S)和Dg AS_(A285S)由野生型的转苷偏好变为水解偏好,并得到了HPLC、HPAEC-PAD和~1H NMR等实验结果支持。(4)GH13家族蔗糖水解酶SHs和淀粉蔗糖酶ASs水解和转苷选择性机理研究。选取具有高分辨率结构的水解酶Xa SH、转苷酶Np AS及其突变体为研究对象。MD模拟结果表明www.selleck.cn/products/INCB18424Xa SH、Np AS_(A287S)的S与亲核试剂D之间具有氢键作用,可导致受体糖分子的位置偏移,使水分子更容易渗透到活性位点发生水解反应。此外,该氢键降低了亲核试剂的p K_a值,可促进糖苷键断裂。QM/MM元动力学模拟结果表明XaEnzyme Assays SH、Xa SH_(S281A)、Np AS、Np AS_(A287S)水解反应自由能垒分别为10.3、13.5、8.9和7.1 kcal·mol~(-1),转苷反应的自由能垒分别为20.3、9.6、8.2和9.6 kcal·mol~(-1),与实验结果一致。分析转苷TS结构发现,当存在氢键时,+1亚位点糖环构象偏移,与-1亚位点糖环产生空间位阻,转苷反应自由能垒高于水解反应;反之,不存在该氢键时,则不存在位阻效应。由氢键作用引发的位阻效应是ASs/SHs是转苷/水解偏好的关键因素。(5)GH70家族Lr Gtf B的α-1,6/α-1,4键型选择性机理研究。QM/MM元动力学模拟结果表明Lr Gtf B糖基化反应为12.2 kcal·mol~(-1);以异麦芽糖为受体时α-1,6和α-1,4转苷反应自由能垒分别为6.7 kcal·mol~(-1)和22.3 kcal·mol~(-1);以麦芽糖为受体时α-1,6和α-1,4转苷反应自由能垒分别为11.7 kcal·mol~(-1)和14.8 kcal·mol~(-1),故Lr Gtf B为α-1,6转苷反应偏好性GHs。此外,分析转苷TS结构发现,+1亚位点上方的loop B具有可塑性,可被α-1,6成键时+1亚位点糖单元定向诱导,导致loop B上的T920的疏水甲基朝向+1亚位点移动,进而稳定糖环构象,促进α-1,6转苷反应。而在α-1,4转苷反应时,由于K1128和+1亚位点糖单元之间的氢键作用限制了+1亚位点糖单元构象空间,导致+1与-1亚位点之间的糖单元间产生空间位阻,从而不利于α-1,4转苷反应。

目的 探讨miR-187-3p对破骨细胞增殖、3-Methyladenine体内实验剂量凋亡、分化的影响及其对叉头框转录因子(FOX)K1/核因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 选取49例骨质疏松(OP)患者为OP组，同时选取绝经后骨质疏松性无骨折患者49例为control组；18只SPF级雌性大鼠，分为正常组与模型组，每组9只；原代分离培养OP大鼠破骨细胞，miR-NC、miR-187-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-FOXK1、miR-187-3p mimics与pcDNA-NC、miR-187-3p mimics与pcDNA FOXK1转染入破骨细胞；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹分别检测OP患者血清与破骨细胞中miR-187-3p、FOXK1的表达量；采用qRT-PCR法检测破骨细胞中耐酒石酸酸性磷酸酶(Acp)-5、基质金属蛋白酶(MMP)9、组织蛋白酶(Cathepsin K)、整合素(Integrinαv)的表达量；采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告基因实验检测miR-187-3p与FOXK1的靶向关系；Wsternal wound infectionestern印迹检测Ki-67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3、p-p65、p-核因子κB抑制蛋白(IкB)α蛋白表达量。结果 与control组比较，OP组血清中miR-187-3p表达水平明显降低，FOXK1表达水平明显升高(均P<0.05);与正常组比较，模型组miR-187-3p表达水平明显降低，FOXK1表达水平明显升高(均P<0.05);与miR-NC组比较，miR-187-3p组细胞活力明显降低，细胞凋亡率明显升高，Ki-67、Acp-5、MMP9、Cathepsin K、Integrinαv、p-p65、p-IкBα表达水平明显降低，Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(均P<0.05);与pcDNA-NC组或miR-187-3p+pcDNDibutyryl-cAMP使用方法A-NC组比较，pcDNA-FOXK1组或miR-187-3p+pcDNA-FOXK1组细胞活力明显升高，细胞凋亡率明显降低，Ki-67、Acp-5、MMP9、Cathepsin K、Integrinαv、p-p65、p-IкBα表达水平明显升高，Cleaved-caspase-3蛋白水平明显降低(均P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实FOXK1是miR-187-3p的靶基因。结论 miR-187-3p过表达可通过下调FOXK1的表达从而抑制破骨细胞增殖、分化及促进破骨细胞凋亡，其作用机制与抑制NF-κB信号通路的活化有关。

食物过敏是过敏性流行病之一,仅次于哮喘病,影响着全球2%～4%的成人和儿童的健康和生命。八大类常见食物过敏原有大豆、花生、小麦、坚果、牛奶、鸡蛋、甲壳类、鱼类,其中水产品占据两类。作为广受青睐的甲壳类水产品,三疣梭子蟹与其他软体类、甲壳类动物存在较强的过敏原交叉反应,其中不耐热且不耐强酸的精氨酸激酶(AK)是主要过敏原之一。同时,作为一种糖蛋白,其致敏性的研究备受关注。引起食物过敏的物质大多是糖蛋白,为探究糖基化修饰对过敏蛋白致敏性和致敏程度的影响,本文在制备和纯化了梭子蟹AK的基础上,对AK结构进行鉴定,并利用生物信息学技术预测和体外实验验证的方法,从结构层面阐释了糖基化修饰对梭子蟹AK致敏性的影响,为梭子蟹及其他水产品的降敏研究提供了理论基础和数据支持。论文主要结论如下:1、从三疣梭子蟹蟹肉中分离获得梭子蟹精氨酸激酶(AK)粗提物,通过SDS-PAGE凝胶电泳发现分子量约为40 KDa的条带,与多篇研究发现的AK相似。为得到纯的过敏原AK,利用制备型电泳进一步分离纯化,为后续的蛋白鉴定、糖基化修饰以及AK致敏性的探究提供了高纯度的样品。经胶内酶切,利用蛋白质组学和液质联用技术鉴定到高覆盖率的精selleckchem S63845氨酸激酶,确认此纯化样品即为三疣梭子蟹过敏原AK。本文利用蛋白质组学方法和LC-MS/MS技术,从特征肽段出发鉴定得到梭子蟹过敏原AK,并对AK的糖基化修饰进行结构表征,为食物过敏原标签规范化提供了重要的基础数据。2、以三疣梭子蟹过敏原AK为研究对象,计算了AK的理化性质,预测了AK的抗原表selleck激酶抑制剂位。结果表明,与三疣梭子蟹AK具有高度序列同源性的是蓝蟹、中华绒螯蟹等节肢动物的AK;三疣梭子蟹AK的B细胞线性抗原表位为39～44、87～103、174～181、309～317、326～330,T细胞线性抗原表位为18～22、52～55、174～175、193～195、229～232、276～277、299～300、345～351,且三疣梭子蟹AK的_(174)Thr-Lys_(175)均出现在B细胞和T细胞抗原表位预测位点,推测174位苏氨酸、175位赖氨酸在免疫原性中起重要作用。利用SWISS-MODEL、Discovery Studio和ZDOCK SERVE进行同源建模和分子对接。c Dock对接结果表明,相较于其他抗过敏药物,梭子蟹AK与西替利嗪的对接互作结合能最高,预测其对由梭子蟹AK引起的食物过敏有更好的降敏效果。西替利嗪主要通过与AK上Arg、Glu和Thr贡献的氢键、离子键亲和结合,推测西替利嗪与AK的结合掩蔽了AK的B细胞线性抗原表位和构象表位,进而降低了致敏蛋白与免疫球蛋白结合的可能性,达到抗过敏的效果。肥大细胞(Mast cell,MC)是过敏的关键驱动因子之一,肥大细胞的相关G蛋白偶联受体可介导MC活化。ZDOCK对接结果显示,无糖基化AK主要通过Tyr134、Ser150、Gly165的氢键和Phe168、Phe186的π-π相互作用与Mrgprb2结合,激活肥大细胞,引发过敏反应。单个糖基化修饰增强了AK的致敏性,但与无糖基化相比并无显著性差异,推Biomacromolecular damage测糖基化修饰会增强AK的致敏性,糖链对AK致敏性的关键作用在于修饰位点,其次是糖基的数量和糖型结构。3、为探究糖基化对AK致敏程度的影响,利用P815肥大细胞脱颗粒实验的组胺释放量和β-氨基己糖苷酶释放量,验证AK致敏性机理的推测。结果表明,过度糖基化对AK致敏性的影响不确定,因而美拉德反应可能无法应用于消减梭子蟹AK致敏性;相较于去糖基化AK,仅去除N-糖链的AK表现出更强的致敏性,这与ZDOCK蛋白对接的结果相一致,猜测是N-糖链的去除暴露了与O-糖链息息相关的构象抗原表位和线性抗原表位;相较于天然AK,仅去除O-糖链的AK表现出更弱的致敏性,猜测是因为破坏了与O-糖链相关的构象抗原表位,以及N-糖链仍掩蔽线性抗原表位的结果。因而,得到了一个推测:O-糖链在构象抗原表位中起重要作用,N-糖链可能会掩蔽线性抗原表位,这给降低梭子蟹AK致敏性的研究提供了一个新思路。