Author: admin

目的 探究孤独症谱系障碍(ASD)中发现的转录因子EB(TFEB)基因3种变异对神经元轴突发育的影响及其机制。方法 构建与ASD相关的3个TFEB突变体质粒和TFEB shRNA干扰质粒，细胞转染上述质粒后通过免Z-VAD-FMK细胞培养疫荧光、细胞核质分离及蛋白免疫印迹检测TFEB变异是否改变其亚细胞定位；利用核糖体抑制剂CHX处理后经蛋白免疫印迹检测TFEB变异对其蛋白稳定性的影响；进行原代小鼠神经元培养并转染上述质粒，通过免疫荧光检测TFEB变异对神经元轴突生长发育的影响；使用实时定量PCR检测TFEB下游自噬-溶酶体基因的表达水平，以荧光素酶报告基因法测量TFEB的转录活性。结果 ASD相关突变体p.R22Q及p.R465W导致TFEB在细胞核的定位增加，但变异并不改变蛋白的稳定性。同时，野生型(WT)TFEB的过表达可增加神经元轴突长度，而ASD相关的TFEB突变体则不能。这表明这些突变导致TFEB促进神经元轴突生长的功能受损。同时，自噬激活剂Rapamycin可恢复由TFEB干扰引起的神经元轴突缩短。TFEB WT的过表达增加Ipatasertib分子式了下游自噬-溶酶体相关靶基因(LAMP1、SQSTM1、CTSB、CTSD、CTSF、MAPLC3)的表达，但ASD相关的TFEB突变体降低了对相关靶基因的调节能力。结论 TFEB变异可能导致自噬-溶酶体功能受损和神经元发育异常，为hepatic dysfunctionASD发病机制和潜在治疗靶点提供了新的见解。

目的：比较自体血小板浓缩生长因子（Concentratedgrowthfactor,CGF）与成纤维细胞生长因子（Basic fibrobNSC 127716体外last growth factor,bFGF）治疗慢性难愈性创面的疗效。方法：选择2021年1月-2022年6月笔者医院收治的110例慢性难愈性创面患者，按随机双色球法分成bFGF组和CGF组，各55例。bFGF组在常规治疗的基础上给予bFselleck HPLCGF外用治疗，CGF组在常规治疗的基础上给予CGF治疗。比较两组患者的创面缩小率、肉芽组织评分、创面愈合时间、疗效、不良反应、自主活动情况[Karnofsky功能状态评分表（Karnofskyperformancestatus,KPS）]及生活质量[生活质量调查表（Quality of life questionnaire-c30,QLQ-C30）]。结果：CGF组患者KPS、QLQ-C30评分、创面缩小率、肉芽组织评分及总有效率均高于bFGF组（P<0.05）,CGF组创面愈合时间短于bFGF组（P<0.05）。结论：相较于bFGF,CGF用于治疗慢性难愈性创面可加速创面愈Biomedical technology合，疗效更佳，值得临床推广应用。

目的 探讨参桃软肝方抗肝癌的作用及机制。方法 四甲基噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2活性及胞内磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/丝裂原活化蛋白激酶（Medical honeyPhosphatidylinositol-3-kinase/ProteinKinaseB/mitogen-activatedproteinkinase,PI3K/Akt/MAPK）抑制剂：LY294002、Atk抑制剂（Akt inhibitor,Akti）、分裂原活化抑制剂（MEK inhibitor,MEKi）、c-Jun氨基末端蛋白激酶抑制剂（c-Jun N-terminal protein kainse i点击此处nhibitor,JNKi）、凋亡抑制剂（Z-VAD）、自噬抑制剂（Wortmanin）、铁死亡抑制剂（Ferrostatin-1）、细胞坏死抑制剂（Necrostatin-1）对参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2活性的影响；乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2的毒性作用；实时荧光定量（Real-time PCR）检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2焦亡标志物白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的影响；蛋白质印迹法（Western blot）检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2中Akt/ERK信号通路关键蛋白Akt、ERK、P-ERK蛋白表达的影响，凋亡信号通路关键蛋白半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶（Caspase 3）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl2）、Bcl2-Associated X的蛋白质（Bax），细胞焦亡标志物卵裂半胱天冬酶1(Cleavaged Caspase-1)蛋白表达的影响。结果 参桃软肝方及醇提上清和沉淀都能有效抑制人肝癌细胞Hep G2的活性（P<0.05）,LY294002、Wortmanin、Akti、MEKi、JNKi、Z-VAD、Ferrostatin-1、Necrostatin-1对参桃软肝方、醇提上清和沉淀抑制人肝癌细胞HepG2活性没有显著的影响；参桃软肝方促进人肝癌细胞HepG2中LDH的释放，引起细胞毒性；参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1的表达；Trichostatin A浓度参桃软肝方降低人肝癌细胞HepG2中Akt的蛋白表达，升高Caspase3蛋白表达量。结论 参桃软肝方具有抑制肝癌细胞活性、抗肝癌的作用，其作用机制可能与自噬、坏死性凋亡等程序性死亡方式及PI3K/Akt/MAPK信号传导无关；能抑制Akt的表达和促进Caspase3表达有关。同时，能降低焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1表达，很可能通过阻断细胞焦亡过程起作用。参桃软肝方抗肝癌活性优于总提物醇提上清和沉淀，醇提上清和沉淀很可能存在协同抗肝癌的作用。

目的 筛选自体外周血造血干细胞（perMK-1775采购ipheral blood stem cell,PBSC）采集的危险因素并建立个体风险预测模型，以提高临床中自体PBSC采集的成功率。方法 通过大数据平台收集2013年2月至2021年5月在海军军医大学第一附属医院血液科行自体PBSC采集术的恶性血液病患者757例，对患者进行单因素显著性统计学分析和Logistic回归分析对PBSC采集危险因素进行筛选。采用Python 3.8.8版本、PyCharm 2021.1.3集成开发环境构建Logistic回归模型和前馈神经网络、最小二乘支持向量机、自动机器学习3种机器学习模型，并采用多种模型评价指标对其评价。结果 共收集患者PBSC采集前的指标24项，单因素和Logistic回归分析筛选出11项PBSC采Handshake antibiotic stewardship集危Erastin IC50险因素。所构建的Logistic回归模型、前馈神经网络、最小二乘支持向量机和自动机器学习模型对自体PBSC采集风险预测的准确度分别为0.822、0.873、0.875和0.973。结论 本研究所建自动机器学习模型能够准确预测自体PBSC采集结果，对提高临床自体PBSC采集成功率具有重要参考价值。

目的:神经炎症是脑出血(Intracerebral Hemorrhage,ICH)后继发性脑损伤的重要宿主防御反应。细胞焦亡是一种新型炎性细胞程序性死亡,引起炎症级联反应,加重继发性脑损伤。脂质运载蛋白-2(Lselleckchemipocalin-2,LCN2)广泛参与涉及炎症的细胞生理病理过程,但在ICH后神经炎症中的作用尚不明确。本研究旨在探讨LCN2表达变化及其干预对大鼠ICH模型后神经炎症及细胞焦亡的影响。方法:第一部分:检索Gene Expression Omnibus(GEO)数据库获取ICH人脑组织Bulk RNA-seq及Single cell RNA-seq数据,结合生物信息学技术明确神经炎症、细胞焦亡在ICH后的变化,明确研究方向。第二部分:本研究使用成年Sprague-Dawley(SD)大鼠构建了ICH模型,并应用有参转录本测序技术筛选差异基因(DEGs)及目标通路。采取血肿周围脑组织检测差异基因及细胞焦亡相关蛋白水平,大鼠外周血进行ELISA分析TNnon-medical productsF-α和IL-1β炎症因子水平,取脑组织切片分别做HE染色、免疫组化、TUNEL染色分析,初步探究相关机制。第三部分:为阐明潜在的机制,构建慢病毒敲除关键基因大鼠ICH模型,取血肿周围脑组织检测差异基因及细胞焦亡相关蛋白水平,取大鼠外周血进行ELISA分析TNF-α和IL-1β炎症因子水平,取脑组织切片分别做HE染色、免疫组化、TUNEL染色分析,验证相关机制。结果:第一部分:从GEO数据库获取11份脑组织RNA-seq数据及13份脑血肿Single cell RNA-seq数据。通过limma包进行基因表达差异分析,通过焦亡通路筛出30个细胞焦亡相关差异基因,其中NLRP3,CASP1,GSDMD在ICH组上调。蛋白质图谱显示差异基因主要在No D-like receptor signaling pathway、TNF signaling pathway、MAPK signaling pathway功能通路中发挥作用。Single cell RNA-seq降维聚类注释得到9630个细胞,10种细胞亚型。运用LXH254 molecular weightMonocle拟时序分析表明细胞焦亡及炎症反应在ICH后逐渐增强,使用Add Module Score函数发现在ICH后小胶质细胞中焦亡基因表达较高。第二部分:构建大鼠ICH模型,模型血肿明显,脑含水量较高,间质水肿和炎症浸润明显,脑组织凋亡细胞增多。大鼠脑组织RNA-seq分析确定了103个显著上调和81个下调的DEGs。LCN2、HSPB1、CXCL10和MEF2B的表达在ICH大鼠中上调。ICH触发IL-1β和TNF-α的释放,并促进细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD和NLRP3的表达。第三部分:慢病毒敲低LCN2,脑组织中的细胞焦亡程度减轻。结论:敲低LCN2有助于缓解细胞焦亡减轻ICH后炎症反应,减轻继发性脑损伤,为ICH的靶向治疗提供方向。

米尔伊丽莎白菌是一种传染性强的病原体,引发蛙的“歪头病”,在蛙类养殖中导致高死亡率,给我国蛙养殖业的经济发展造成了巨大的损失。米购买SAG尔伊丽莎白菌快速灵敏的检测至关重要,在本研究中我们将RPA技术应用于米尔伊丽莎白菌的检测,建立了荧光RPA(exo RPA)和胶体金试纸条RPA(RPA-LFD)两种方法,实现了对米尔伊丽莎白菌的早期检测,是有效控制传染病爆发和传播的手段。通过接种疫苗的方法来防治疾病已成为国内外渔业病害防治研究的热点。本文通过筛选不同的佐剂制备了米尔伊丽莎白菌灭活疫苗为蛙养殖病害防治奠定基础。目前,国内外渔业病害防治大都通过接种疫苗来预防。本文通过筛选不同的佐剂制备了米尔伊丽莎白菌灭活疫苗,为蛙养殖的病害histopathologic classification防治提供了参考数据。主要结果如下:1.筛选引物和探针,建立exo RPA和RPA-LFD方法在本研究中,我们针对米尔伊丽莎白菌的mut T基因,设计了9对引物,其中mut T705/706的扩增效果最好,被选为最佳引物用于后续检测。我们建立了exo RPA和RPA-LFD法检测米尔伊丽莎白菌,可以在38℃下30 min内完成特异性和灵敏性检测。RPA-LFD和exo RPA检测的灵敏限度是10~2copies/μl,比普通PCR检测灵敏10倍。通过检测多个DNA样本(米尔伊丽莎白菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、Cy HV-2和鲶爱德华菌),结果显示该方法仅在米尔伊丽莎白菌DNA样品中显示出目的条带。通过涂布平板法和q RT-PCR法检测组织中细菌载量以确定米尔伊丽莎白菌的靶器官,旨在使exo RPA和RPA-LFD法在实际中的应用更简捷。结果显示脑组织的细菌载量高,是米尔伊丽莎白菌趋向性组织。我们选取脑组织进行早期检测病原。采用PCR、传统RPA、RPA-LFD和exo RPA方法检测了随机选取的24只青蛙,结果显示RPA-LFD和exo RPA方法能够快速准确地检测出米尔伊丽莎白菌。2.米尔伊丽莎白菌灭活疫苗的制备将保存的米尔伊丽莎白菌在BHI培养基中28℃恒温培养24 h,挑取单克隆菌落接种至BHI培养基扩大培养至对数期,在4℃下以5000 r/min离心10 min,收集沉淀,PBS重悬,离心三次,用0.3%甲醛灭活细菌48 h,测定OD值,通过OD值和生长指数制作标准曲线,计算出米尔伊丽莎白菌的半致死浓度,制备米尔伊丽莎白菌的灭活疫苗。3.灭活疫苗联合免疫佐剂在活体中的应用。在本研究中,我们将500只黑斑蛙平均分为10组,一半用于生存率检测,一半用于取样,分别为对照组、疫苗组、疫苗+山莨菪碱组、疫苗+壳聚糖组以及疫苗+β-葡聚糖组。每组浸泡免疫1 h,在7 d后加强免疫浸泡一次,在第15d时进行米尔伊丽莎白菌肌肉注射攻毒检测生存率。结果显示:疫苗+壳聚糖组的保护率为63%,疫苗+山莨菪碱组的保护率为57%,显著高于对照组(17%)。为了探究其保护机制,我们研究了血清酶活、炎症反应、细菌负荷和组织损伤。结果表明,壳聚糖和山莨菪碱可增强疫苗免疫效果,提高血清中SOD、溶LZM和C3的活性。此外,还可以通过快速调动和恢复白细胞水平,有效调节炎症反应,显著降低脑、肝、肾、眼组织的细菌负荷,明显减轻肝、脑、肾、眼组织损伤。由此可见,壳聚糖和山莨菪碱做为免疫佐剂增强了疫苗的免疫调节作用,可有效预防蛙歪头病。这为蛙养殖提供MG132 NMR了防治的初步方案,以降低细菌性疾病对蛙养殖业造成的损失。本研究围绕米尔伊丽莎白菌建立了RPA-LFD和exo RPA两种快速检测方法,证明了其实际应用中的可靠性;并制备了米尔伊丽莎白菌灭活疫苗,验证了灭活疫苗联合免疫佐剂在活体中的浸泡免疫效果,提高了青蛙的免疫效力和生存率。为青蛙养殖和早期检测提供了一定的理论基础和初步的数据参考。

米尔伊丽莎白菌是一种传染性强的病原体,引发蛙的“歪头病”,在蛙类养殖中导致高死亡率,给我国蛙养殖业的经济发展造成了巨大的损失。米购买SAG尔伊丽莎白菌快速灵敏的检测至关重要,在本研究中我们将RPA技术应用于米尔伊丽莎白菌的检测,建立了荧光RPA(exo RPA)和胶体金试纸条RPA(RPA-LFD)两种方法,实现了对米尔伊丽莎白菌的早期检测,是有效控制传染病爆发和传播的手段。通过接种疫苗的方法来防治疾病已成为国内外渔业病害防治研究的热点。本文通过筛选不同的佐剂制备了米尔伊丽莎白菌灭活疫苗为蛙养殖病害防治奠定基础。目前,国内外渔业病害防治大都通过接种疫苗来预防。本文通过筛选不同的佐剂制备了米尔伊丽莎白菌灭活疫苗,为蛙养殖的病害histopathologic classification防治提供了参考数据。主要结果如下:1.筛选引物和探针,建立exo RPA和RPA-LFD方法在本研究中,我们针对米尔伊丽莎白菌的mut T基因,设计了9对引物,其中mut T705/706的扩增效果最好,被选为最佳引物用于后续检测。我们建立了exo RPA和RPA-LFD法检测米尔伊丽莎白菌,可以在38℃下30 min内完成特异性和灵敏性检测。RPA-LFD和exo RPA检测的灵敏限度是10~2copies/μl,比普通PCR检测灵敏10倍。通过检测多个DNA样本(米尔伊丽莎白菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、Cy HV-2和鲶爱德华菌),结果显示该方法仅在米尔伊丽莎白菌DNA样品中显示出目的条带。通过涂布平板法和q RT-PCR法检测组织中细菌载量以确定米尔伊丽莎白菌的靶器官,旨在使exo RPA和RPA-LFD法在实际中的应用更简捷。结果显示脑组织的细菌载量高,是米尔伊丽莎白菌趋向性组织。我们选取脑组织进行早期检测病原。采用PCR、传统RPA、RPA-LFD和exo RPA方法检测了随机选取的24只青蛙,结果显示RPA-LFD和exo RPA方法能够快速准确地检测出米尔伊丽莎白菌。2.米尔伊丽莎白菌灭活疫苗的制备将保存的米尔伊丽莎白菌在BHI培养基中28℃恒温培养24 h,挑取单克隆菌落接种至BHI培养基扩大培养至对数期,在4℃下以5000 r/min离心10 min,收集沉淀,PBS重悬,离心三次,用0.3%甲醛灭活细菌48 h,测定OD值,通过OD值和生长指数制作标准曲线,计算出米尔伊丽莎白菌的半致死浓度,制备米尔伊丽莎白菌的灭活疫苗。3.灭活疫苗联合免疫佐剂在活体中的应用。在本研究中,我们将500只黑斑蛙平均分为10组,一半用于生存率检测,一半用于取样,分别为对照组、疫苗组、疫苗+山莨菪碱组、疫苗+壳聚糖组以及疫苗+β-葡聚糖组。每组浸泡免疫1 h,在7 d后加强免疫浸泡一次,在第15d时进行米尔伊丽莎白菌肌肉注射攻毒检测生存率。结果显示:疫苗+壳聚糖组的保护率为63%,疫苗+山莨菪碱组的保护率为57%,显著高于对照组(17%)。为了探究其保护机制,我们研究了血清酶活、炎症反应、细菌负荷和组织损伤。结果表明,壳聚糖和山莨菪碱可增强疫苗免疫效果,提高血清中SOD、溶LZM和C3的活性。此外,还可以通过快速调动和恢复白细胞水平,有效调节炎症反应,显著降低脑、肝、肾、眼组织的细菌负荷,明显减轻肝、脑、肾、眼组织损伤。由此可见,壳聚糖和山莨菪碱做为免疫佐剂增强了疫苗的免疫调节作用,可有效预防蛙歪头病。这为蛙养殖提供MG132 NMR了防治的初步方案,以降低细菌性疾病对蛙养殖业造成的损失。本研究围绕米尔伊丽莎白菌建立了RPA-LFD和exo RPA两种快速检测方法,证明了其实际应用中的可靠性;并制备了米尔伊丽莎白菌灭活疫苗,验证了灭活疫苗联合免疫佐剂在活体中的浸泡免疫效果,提高了青蛙的免疫效力和生存率。为青蛙养殖和早期检测提供了一定的理论基础和初步的数据参考。

目的 分析超声乳化人工晶状体(IOL)植入术联合小梁切除术对白内障合并青光眼患者视觉质量的影响。方法 选取2019年3月至2022年3月南阳市眼科医院收治的88例白内障合并青光眼患者为研究对象，按照随机数字表法分为单一组与联合组，每组44例，单一组采取超声乳化IO更多L植入术，联合组在单一组的基础上采用小梁切除术。比较两组视功能指标[散光、中央前房深度(ACD)、眼内压(IOP)]、角膜内皮细胞、视觉质量、并发症发生率。结果 术后1个月联合组散光、IOP水平低于单一组，ACD水平高于单一组，细胞面积变异系数、平均细胞面积、角膜中心厚度均低于单一组(P<0.05),看电视、阅读书写、精细操作评分高于单一组，两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);联合组并发症发生率为13.64%(6/44),单一组为9.09%(4/Medicina basada en la evidencia44),差异未见统计学意义(P>0.05)。结论 超声乳化IOL植入术联合小梁切除术在白内障合并青光Belumosudil化学结构眼患者中能降低眼压及散光，提高前房深度，还能保证角膜内皮细胞的完整，提高视觉质量，且二者联合安全性较高。

目的 分析无先兆偏头痛患者血小板计数、血小板体积分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)与患者临床特征的相关性。方法 选取95例无先兆偏头痛患者纳入无先兆MC3偏头痛组,根据类型不同分为发作性偏头痛组(32例)、慢性偏头痛不合并药物过量性头痛组(32例)、慢性偏头痛合并药物过量性头痛组(31例)3个亚组。另选取同期90例健康体检者作为对照组。收集临床数据包括视觉模拟评分法(VAS)评分、每次头痛持续时间、每月头痛天数、每月口服止痛药天数。收集血小板参数包括血小板计数、血小板体积分布宽度、平均血小板体积。比较两组血小板参数,分析血小板参数诊断无先兆偏头痛的价值,比较不同类型无先兆偏头痛的血小板参数,分析无先兆偏头痛患者血小板参数与临床特征的相关性。结果 无先兆偏头痛组的血小板计数为(252.81±56.07)×10~9/L,与对照组的(250.78±57.88)×10~9/L比较,差异无统计学意义(P>0.05)。无先兆偏头痛组的血小板体积分布宽度为(16.03±0.35)%,高于对照组的(15.64±0.32)%,差异有统计学意义(P<0.05)。无先兆偏头痛组的平均血小板体积为[9.10(8.70,10.20)]fl,高于对照组的[8.85 (8.23,9.80)]fl,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)结果显示,血小板体积分布宽度预测无先兆偏头痛的ROC下面积(AUC)为0.764,最佳临界值为15.85%；平均血小板体积预测无先兆偏头痛的AUC为0.717,最佳临界值为8.75 fl。3个亚组的血小板计数、平均血小板体积比较,差异无统计学意义(P>0.05)。慢性偏头痛合并药物过量mycobacteria pathology性头痛组患者血小板体积分布宽度(16.13±0.3Lapatinib体内实验剂量3)%高于发作性偏头痛组的(15.89±0.39)%,差异有统计学意义(P<0.05)。无先兆偏头痛患者血小板体积分布宽度与每月头痛天数、每月口服止痛药天数呈正相关关系(r=0.376、0.279,P<0.05)。结论 血小板体积分布宽度和平均血小板体积对无先兆偏头痛有诊断预测价值,对临床分型和临床特征的评估有一定的预测价值；血小板体积分布宽度可作为无先兆偏头痛诊断和预后评估的生物标志物。

目的 探讨血清肝素结合蛋白(HBP)与老年维持性血液透析(MHD)患者导管感染的关系Entinostat及其应用价值。方法 行MHD治疗的199例老年患者根据研究期间是否存在导管感染分为感染组(n=41)和非感染组(n=158)。收集两组一般临床资料和实验室检查指标，检测C反应蛋白(CRP)、降钙素原(selleck AZD6738PCT)和HBP水平。利用受试者工作特征(ROC)曲线明确各指标对导管感染及感染病原菌的鉴别价值。结果 41例发生血液透析导管感染，包括17例隧道感染和24例导管相关血源感染。分泌物或血培养36例，阴性5例。36例微生物培养阳性患者包括革兰阳性菌21例，革兰阴性菌15例。同非Symbiont interaction感染组相比，感染组合并糖尿病比例显著升高，透析龄更短，且白细胞计数、PCT、CRP及HBP水平显著升高(均P<0.001)。HBP对老年MHD患者导管感染进行辅助诊断的诊断效能最大，鉴别的特异性高达94.32%。革兰阴性菌组血清PCT和HBP水平显著高于革兰阳性菌组(均P<0.01)。HBP鉴别老年MHD导管感染患者为革兰阴性菌的曲线下面积为0.84,敏感性和特异性分别为80.04%和84.99%。结论 血清HBP水平对老年MHD患者导管感染具有一定的诊断效能，且对革兰阴性菌感染具有一定的参考价值。