目的 探讨System Xc-/GPX4/Nrf2通路介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障损伤程度及炎症状态的影响。方法 24只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、铁死亡组、治疗组各6只。脓毒症组、铁死亡组、治疗组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型，假手术组开腹游离盲肠后还纳关腹。造模即刻，治疗组皮下注射去铁胺20 mg/kg,铁死亡组腹腔注射铁死亡激活剂Erastin 20 mg/kg,假手术组和脓毒症组腹腔注射等量生理盐水，注射后4组均皮下注射37℃生理盐水50 mg/kg液体复苏。造模24 h大鼠麻醉后开腹，取十二指肠(空肠),机械法组织匀浆后收集细胞悬液，应用荧光探针法检测小肠平滑肌细胞活性氧(ROS);透射电镜下观察小肠上皮组织中线粒体形态。然后腹主动脉采血离心取血清，采用比色法检测Fe~(3+)、D-乳酸脱氢酶(D-LDH)水平，采用硫代巴比妥酸缩合法检测丙二醛(MDA)水平，采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。采血后处死大鼠，取小肠组织，采用HE染色观察组织病理学改变，采用免疫组织化学ABC法检测GPX4、Nrf2、Claudin-1阳性面积百分比，采用Western blot法检测GPX4、Nrf2、Claudin-1蛋白相对表达量。结果 (1)治疗组[(56 528±182)×10~5/mL]、脓毒症组[(67 964±844)×10~5/mL]、铁死亡组[(71 958±1 306)×10~5/mL]小肠平滑肌细胞ROS荧光强度均高于假手术组[(52 551±438)×10~5/mL](P<0.05),脓毒症组、铁死亡组高于治疗组(P<0.05),铁死亡组高于脓毒症组(P<0.05)。(2)假手术组小肠上皮组织线粒体形态完整、嵴丰富整齐、双膜结构存在且体积较大；脓毒症组线粒体体积变小，膜信号变强，线粒体嵴松散并发生溶解现象；治疗组线粒体体积较脓毒症组略有恢复，双膜结构部分存在，线粒体嵴少量溶解；铁死亡组线粒体体积较脓毒症组进一步缩小，膜密度增高，线粒体嵴发生溶解及消失。(3)脓毒症组、治疗组、铁死亡组血清Fe~(3+)含量低于假手术组(P<0.05),MDA、D-LDH水平均高于假手术组(P<0.05);脓毒症组、铁死亡组血清Fe~(3+)含量低于治疗组，MDA、D-LDH水平高于治疗组(P<0.05);铁死亡组血清Fe~(3+)含量低于脓毒症组，MDA、D-LDH水平高于脓毒症组(P<0.05)。(4)脓毒症组、治疗组、铁死亡组血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平均高于假手术组(P<0.05),脓毒症组、铁死亡组高于治疗组(P<0.05),铁死亡组高于脓毒症组(P<0.05)。(5)假手Gefitinib IC50术组小肠绒毛丰富规整、未见基底层分离及毛细血管充血；脓毒症组绒毛顶端出现溶解、破碎，炎症细胞浸润明显，毛细血管充血；治疗组绒毛顶端部分破裂情况略有好转，但仍有毛细血管充血、炎症细胞浸润；铁死亡组小肠绒毛已出现崩解、脱落，炎症组织浸润明显，部分延伸到绒毛两侧，黏膜与黏膜selleck合成下层出现分离。(6)脓毒症组、治疗组、铁死亡组Nrf2阳性面积百分比大于假手术组(P<0.05),GPX4、Claudin-1阳性面积百分比小于假手术组(P<0.05);脓毒症组、铁死亡组Nrf2阳性面积百分比大于治疗组，GPX4、Claudin-1阳性面积百分比小于治疗组(P<0.05);铁死亡组Nrf2阳性面积百分比大于脓毒症组，GPX4、Claudin-1阳性面积百分比小于脓毒症组(P<0.05)。(7)脓毒Specific immunoglobulin E症组、铁死亡组Nrf2蛋白相对表达量高于治疗组，GPX4、Claudin-1蛋白相对表达量均低于治疗组(P<0.05);铁死亡组Nrf2蛋白相对表达量高于脓毒症组，GPX4、Claudin-1蛋白相对表达量均低于脓毒症组(P<0.05)。结论 脓毒症大鼠模型肠道损伤中存在铁死亡现象；抑制System Xc-/GPX4/Nrf2通路介导的铁死亡，可改善脓毒症大鼠肠道机械屏障的损伤程度及炎症状态。
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不同抗凝监测指标与心脏术后患儿体外膜肺氧合期间肝素浓度的相关性
目的 评价活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,aPTofacitinib临床试验TT）、活化凝血时间（activated clotting time,ACT）以及Drug immunogenicity抗Ⅹa因子（anti-Ⅹa）的活性与心脏术后患儿体外膜肺氧合（extracorporeal membrane oxygenation,ECMO）期间普通肝素（unfractionated heparin,UFHCHIR-99021细胞培养）输注浓度的相关性。方法 回顾性连续收集2013年1月—2020年10月于中国医学科学院阜外医院心脏外科术后接受ECMO支持患儿（年龄6月龄至6岁）的临床资料，并记录ECMO运行期间同时测量的aPTT值、ACT值、anti-Ⅹa活性以及相对应的UFH的剂量。根据体外生命支持组织抗凝指南定义ECMO支持期间患儿的出血事件，并根据是否出现出血事件将患儿分为出血组与非出血组。采用Pearson相关系数评估同一患者同时测定的ACT、aPTT或anti-Ⅹa活性与UFH之间的相关性。结果 共纳入58例患儿，其中男33例、女25例，年龄为（27.31±34.17）个月。出血组39例和非出血组19例。单因素分析结果显示，与非出血组患儿相比，出血组患儿在安装ECMO当日的红细胞计数（P=0.049）、血红蛋白浓度（P=0.010）以及红细胞比容（P=0.046）均较低；而且出血组患儿的新鲜冰冻血浆（P=0.034）以及纤维蛋白原（P=0.033）的输注量较多，开胸探查止血的患者比例较高（P=0.000）;ACT、aPTT与UFH之间均不存在线性相关性；然而，anti-Ⅹa活性与UFH存在中等程度相关（r=0.418,P=0.013）。结论 aPTT值和ACT值与心脏术后患儿ECMO期间UFH输注浓度相关性差，而anti-Ⅹa活性与其存在中等程度相关。
EDⅢK307是西尼罗病毒感染的重要位点
目的 探讨西尼罗病毒EDⅢK307位点对西尼罗病毒包装以及入侵的影响。方法 对西尼罗病毒EDⅢ进行点突变——K307A，再将突变后的表达载体pcDNA3.1-CME K307A与prWNV-RlMedium chain fatty acids (MCFA)uc共转染293T细胞，72 h后www.selleck.cn/products/MG132收集细胞培养上清，通过电镜观察上清中西尼罗假病毒颗粒形态，并利用PCR法扩增病毒基因组NS1片段序列以确证突变假病毒是否包装成功；继而利用上清感染BHK21细胞，通过检测感染后BHK21细胞胞内荧光素酶值来判断突变假病毒对靶细胞的感染性。结果 细胞培养上清中可见比较均一的病毒颗粒，呈圆形、有包膜，直径在40～50 nm;PCR扩增可见基因组NS1特异条带。上述结果均证实成功包装出突变型假病毒颗粒。感染实验显示，与未突变假病毒颗粒相比，K307A位点突变后的假病毒颗粒丧失了感染靶细胞的能JQ1抑制剂力。结论 K307位点很可能参与了西尼罗病毒的感染，是西尼罗病毒与受体结合的关键位点，从而可能成为阻断西尼罗病毒感染药物的重要靶点。
针灸疗法配合明目汤剂治疗原发性开角型青光眼近期疗效及对生活质量的影响
目的 探究针灸疗法配合明目汤剂治疗原发性开角型青光眼(POAG)的近期疗效及对生活质量的影响。方法 收集50例于我院就诊的POAG患者，随机分为对照组与试验组，各25例；对照组给予降眼压等基础治疗，试验组在此基础上实施针灸配合明目汤剂治疗，比较两组患者的相关指标和治疗效果。结果 治疗前两组青光眼观察指标值无明显差别(P>0.05);治疗后试验组眼压、视野Ms值低于对照组，视力与视野MD值高于对照组(P<0.05);治疗后试验组黄斑全层厚度、黄斑视网膜神经节细胞层厚度均高于对照组，黄斑区血管密度低于对更多照组(P<0.05);两组患者视盘区RPE开口距离无明显差异(PRP56976分子量>0.05);试验组患者治疗有效率RNA biology(96.00%)高于对照组(72.00%)(P<0.05)。结论 对POAG患者实施针灸配合明目汤剂治疗，有助于改善患者的眼压和视野，提高视力，降低黄斑区血管密度，增加黄斑全层及黄斑视网膜神经节细胞层厚度，从而保护患者视功能，具有较高的临床应用价值。
黄芩素对激素性股骨头坏死预防作用的实验研究
研究背景与目的:糖皮质激素诱发的股骨头坏死是此类药物治疗后严重的不良反应之一,已有的大量研究结果表明激素性股骨头坏死的发病机制涉及多种因素,是多因素共同作用的结果。激素性股骨头坏死发展至晚期往往会诱发致残,使患者不得不接受人工全髋关节置换术,对患者健康的危害不容忽视,早期干预显得意义重大,但目前尚无明确推荐可用于预防治疗的药物。已提出的一些药物干预方案大多针对发病机制中的某一方面,效果并不是非常理想。在已有的一些体外研究和动物模型实验研究中,黄芩素被报道所具有的多种调节作用理论上都可应用于该疾病发病过程的干预,有可能通过多方面的作用去干预激素性股骨头坏死的发病进而产生保护作用,提示其可能是一种多效性的潜在干预药物。本研究欲对激素性股骨头坏死的SD大鼠模型早期应用黄芩素,并从表型水平探究其对该疾病实际的保护效果,为发现新的激素性股骨头坏死预防治疗性药物提供实验依据。材料与方法:选择10周龄健康雄性SD大鼠36只,适应性喂养1周后,随机表法把大鼠为3组,每12只一组,依次为空白对照组(CG)、模型组(MG)、黄芩素干预组(IG)。模型组(MG)处置:首先腹腔注射脂多糖(LPS 20μg/kg)2次,间隔24h;第二次LPS注射后间隔24h肌注甲泼尼龙琥珀酸钠(MPSS 40 mg/kg),连续3天(注射间隔24h);初次注射激素的同时以生理盐水代替黄芩素灌胃,每日一次,持续6周;黄芩素干预组(IG):上述同法予以造模药物,并在初次注射激素时即予以黄芩素300mg/kg由生理盐水配置为悬浊液灌胃,每日一次,持续6周;空白对照组(CG):其他实验组所用selleck Galunisertib注射/灌胃药物用生理盐水替代在同一操作时间段给予。饲养期间允许大鼠自由进食纯净水和饲料。观察、检测大鼠以下几方面的情况:1.大鼠一般情况及体重变化实验期间每日观察记录各组大鼠的进食水情况、活动和毛发情况以及精神状态。每周测量记录各组大鼠LY2835219价格体重。2.血清指标①丙二醛(MDA)水平:实验至两周时,大鼠经鼠尾静脉取血约2ml并离心提取上层血清,使用TBA法检测丙二醛(MDA)水平。②血脂水平:兽用全自动生化分析仪检测血脂(总胆固醇TC、甘油三酯TG)。③骨代谢标志物水平:ELISA法检测骨代谢标志物(BALP、PINP、β-CTX)。实验进行至6周时,各组大鼠以戊巴比妥钠40mg/kg经腹腔内注射实施麻醉,由下腹部经腹主动脉取血约6ml,进行②、③项指标的检测。3.股骨头检测3.1股骨头标本大体外形情况大鼠采集血液后,经下腔静脉注射戊巴比妥钠200mg/kg实行安乐死,随后完整取出双侧后肢股骨头,观察并拍照记录股骨头大体外观,4%多聚甲醛对股骨头进行固定、保存。3.2股骨头Micro-CT扫描大鼠一侧股骨头进行Micro-CT扫描,使用重建程序对扫描结果进行骨三维重建呈像;选定股骨头软骨下骨松质区为研究感兴趣区域(ROI)并测量和记录以下五项骨组织参数:骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁数量(Tb.N)、骨密度(BMD)。3.3股骨头标本切片观察与分析①HE染色:观察组织形态,计算空骨陷窝率,根据骨坏死病理诊断标准计算股骨头骨坏死率。②TRAP染色:进行破骨细胞计数。③TUNEL染色:计算细胞凋亡率。4.统计分析:应用SPSS 26.0及GraphPad Prism 8.0.2软件进行数据分析,各组定量资料先进行正态性以及方差齐性的检验,分布通过正态性检验的资料使用均数±标准差(x±S)来表示,先通过单因素方差分析法对组间差异性进行检测,方差齐使用LSD检验对组间差异性的两两比较进行检测,方差不齐使用Welch校正,两两比较使用Dunnett’s T3检验。定性资料以频数来表示,行Fisher精确检验。P值<0.05判定为差异有统计学意义。结果:1.大鼠一般情况及体重变化CG组大鼠一般情况均正常,体重持续平稳增加。MG组大鼠造模后2周内进食水明显减少,精神较萎靡,对外界刺激后反应较迟钝,毛发出现干燥以及脱落,这些情况持续约2周后逐渐恢复正常,第4周时与CG组基本相同;体重在造模周(第1周内)明显下降,随后2周增长缓慢,第3周后明显上升。IG组大鼠一般情况在造模后的一周内与MG组相似,但程度相对较轻,第2周开始恢复正常,第3周时与CG组无异;体重在造模周改变与MG组相似,随后持续平稳上升。大鼠体重在基线水平无明显组间差异。在实验期间始终为黄芩素干预组大鼠体重大于模型组而小于空白对照组(差异均有统计学意义)。2.血清指标①丙二醛(MDA)水平:两周时,MG组>CG组(*P<0.05);IG组
黄刺多糖对STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠糖脂代谢的调节作用
论文旨在探究黄刺多糖(Berberis dasystachya Maxim. Polysaccharide， BDP)对链脲佐菌素(STZ)诱导的Roxadustat作用Ⅰ型糖尿病大鼠的糖脂代谢的调节作用，以期为预防及治疗糖尿病提供理论支持。采用STZ诱导Ⅰ型糖尿病大鼠模型，糖尿病模型大鼠随机分为Tezacaftor供应商模型对照组、多糖低剂量组(BDP-L，100mg/kg)、中剂量组(BDP-M，200mg/kg)，高剂量组(BDP-H，400mg/kg)。灌胃28 d后，监测大鼠体重及血糖变化，测定血脂水平、脂代谢酶活性及体内抗氧化酶活等指标。结果表明：黄刺多糖给药第28 d，与模型组相比BDP给药组的血糖、血脂水平均显著降低，其中高剂量组血糖下降39.16%( P<0.01)。BDP给药组的血清胰岛素水平、肝糖原（HG）水平有所增加(P<0.05或P<0.01)，其中高剂量组的大鼠血清胰岛素水平增加1.28倍(P<0.01)，HG水平增加89.79%(P<0.01)。相比较模型组大鼠，经BDP给药后大鼠/血清和胰腺中的过氧化氢酶（CAT），超氧化物歧化酶（SOD）和还原性谷胱甘肽（CSH-Px）以剂量依赖性方式显著增加(P<0.05或P<0.01)，丙二醛（MDA）含量显著减少(P<0.05)。综上，黄刺多糖通过改善Ⅰ型糖尿病大鼠氧化应medicine management激从而保护胰岛β细胞的损伤，进而改善糖尿病大鼠的糖脂代谢。
肠外营养处方糖脂比合理范围重要性探讨
目的：探讨临床实践中因肠外营养糖脂比不合理导致的相关用药安全性问题，BYL719分子式为临床营养药物的合理应用提供依据。方法：从建库开始截至2023年2月28日，检索国内外相关数据库，对纳入文献及笔者在临床实践中遇到的不合理糖脂比处方导致的临床不良结局进行汇总和分析。结果：共纳入11篇文献，另有笔者通过调整不合理的糖脂比，病人不适好转病例1例。共涉及86例病人，男性51例，女性35例。年龄最小18岁，最大89岁。86例病人共发生临床不良结局79次，其中共有Cedar Creek biodiversity experiment死亡病例8例，临床不良结局发生率分别为：肝功能异常46.8%(37/79)、胆汁淤积22.8%(18/79)、脂肪Z-VAD-FMK供应商超载综合征13.9%(11/79)、肝脂肪变性11.4%(9/79)、血小板减少3.8%(3/79)、其它1.3%(1/79)。86例病人中，明确记载的有2例病人通过调整糖脂比后，临床不良结局得到改善，其他不详。结论：不适宜的糖脂比可能导致肠外营养相关用药的安全性问题，应引起临床重视。
白黎芦醇对运动性疲劳大鼠糖异生途径的影响及其调控机制
目的:探讨白藜芦醇对运动性疲劳大鼠糖异生能力的影响及其调控机制。方法:采用负重游泳训练模拟长时间大强度运动。6-8周龄雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组(C),白藜芦醇组(R),运动组(E),白藜芦醇+运动组(RE),每组12只。E组和RE组每天负重5%游泳1小时,每周6天,共6周。R组和RE组灌胃50 mg/kg的白藜芦醇溶液,C组和E组灌胃等体积的二甲基亚砜溶液。给药方式为运动后1h后灌胃,每天一次,连续6周。最后—次运动结束时检测即刻血糖,24h后收取血液和肝脏等组织,检测大鼠血浆BUN、CK水平衡量疲劳程度;检测血糖浓度、肝糖原水平、乳酸和丙酮酸含量衡量肝脏糖异生水平;试剂盒检测PEPCK和G6Pase含量;RT-PCR检测肝脏组织SIRT1、CREB和PGC-1α的mRNA表达水平。结果:(1)经过六周的干预后,对大鼠血浆BUN和CK水平进行运动×白藜芦醇的双因素方差分析,BUN水平存在显著的交互效应(P<0.05),简单效应分析显示,E组血浆BUN含量显著高于C组(P<0.05),RE组血浆BUN含量显著低于E组(P<0.01)。CK水平不存在显著的交互效应(P>0.05),独立样本t检验分析显示,E组血浆中CK含量显著高于C组(P<0.05),RE组血浆中CK含量显著低于E组(P<0.05)。Z-VAD-FMK浓度(2)经过六周的干预后,对大鼠血糖和肝medical management糖原水平进行运动×白藜芦醇的双因素方差分析,血糖水平不存在显著的交互效应(P>0.05),独立样本t检验分析显示,E组血浆中血糖水平显著低于C组(P<0.01),RE组血糖水平显著高于E组(P<0.05)。肝糖原水平存在显著的交互效应(P<0.05),简单效应分析显示,E组大鼠肝糖原含量显著低于C组(P<0.01),RE组大鼠肝糖原含量显著高于E组(P<0.01)。经过六周的干预后,对大鼠肝脏中乳酸含量、丙酮酸含量和乳酸/丙酮酸比值进行运动×白藜芦醇的双因素方差分析,三者水平均存在显著的交互效应(P<0.05),简单效应分析显示,E组大鼠肝脏中乳酸、丙酮酸含量和乳酸/丙酮酸比值显著高于C组(P<0.01,P<0.01,P<0.01),RE组大鼠肝脏中乳酸、丙酮酸含量和乳酸/丙酮酸比值显著低于E组(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。(3)经过六周的干预后,对大鼠肝脏中PEPCK和G6Pase含量进行运动×白藜芦醇的双因素方差分析,PEPCK含量存在显著的交互效应(P<0.05),简单效应分析显示,E组大鼠肝脏中PEPCK含量显著低于C组(P<0.01),RE组大鼠肝脏中PEPCK含量显著高于E组(P<0.01)。G6Pase含量不存在显著的交互效应(P>0.05),独立样本t检验分析显示,E组糖异生限速酶G6Pase的含量显著低于C组(P<0.05),RE组糖异生限速酶G6Pase的含量高于E组,但无显著差异Tamoxifen(P>0.05)。(4)经过六周的干预后,对大鼠肝脏中SIRT1、CREB和PGC-1α的mRNA进行运动×白藜芦醇的双因素方差分析,SIRT1、CREB的mRNA不存在显著的交互效应(P>0.05),独立样本t检验分析显示,R组肝脏中SIRT1的mRNA显著高于C组(P<0.01),E组肝脏中SIRT1、CREB的mRNA显著低于C组(P<0.01),RE 组肝脏中 SIRT1、CREB 的 mRNA 显著高于 E 组(P<0.01)。PGC-1α的mRNA存在显著的交互效应(P<0.05),简单效应分析显示,E组大鼠肝脏中PGC-1α的mRNA水平显著低于C组(P<0.01),RE组大鼠肝脏中PGC-1α的mRNA水平显著高于E组(P<0.01)。结论:白藜芦醇对长时间大强度运动导致的运动性疲劳有改善效果,其机制可能与调控SIRT1/CREB/PGC-1α通路,提高PEPCK活性,促进肝脏糖异生,升高血糖和肝糖原水平有关。
硝基苯缺氧敏感药物递释系统的级联响应抗肿瘤增效机制研究
刺激响应性纳米药物递释系统能在内源或外源性刺激下,实现靶标部位特异性响应,有效解决化疗药物系统毒性和生物利用度低的困境。缺氧是肿瘤病理微环境特征之一,缺氧环境中还原性酶及还原性物质高表达,为缺氧敏感响应纳米药物递释系统设计提供了契机。肿瘤及早诊治具有重要临床意义,但早期肿瘤缺氧条件不充分,并且缺氧环境具有异质性特点,导致缺氧敏感载体响应的选择性及灵敏度较低,影响疗效。为了提高缺氧敏感纳米药物递释系统体内响应的选择性及灵敏度,级联响应策略被提出以放大早期肿瘤部位和正常组织的差异,实现肿瘤组织快速敏感响应。本文致力于设计硝基苯级联响应缺氧敏感纳米药物递释系统,通过葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOx)及光动力治疗(Photodynamics Therapy,PDT)两种策略加剧早期肿瘤缺氧,激活级联缺氧响应,加速肿瘤部位特异性释药或增敏铁死亡,实现抗肿瘤增效目的。以6-氨基己酸为桥联分子,氨基端经酰化反应连接缺氧敏感响应分子对硝基氯甲酸苄酯(P-nitrobenzyl chloroformate,PNZ-Cl),并通过酰胺反应将羧基端嫁接至荷正电的壳聚糖(Chitosan,CS),合成壳聚糖-硝基苯缺氧敏感嫁接物(Chitosan grafted nitrobenzene,CS-PNZ-Cl)。以抗肿瘤药物米托蒽醌(Mitoxantrone,MIT)为模型药物,CS-PNZ-Cl疏水空腔包封MIT,同时通过CS-PNZ-Cl表面的正电荷静电复合荷负电的GOx,制备复合Galunisertib试剂GOx的壳聚糖-硝基苯级联响应缺氧敏感载药纳米粒(GOx/MIT@CS-PNZ-Cl)。通过血液循环分布至肿瘤部位后,GOx作为启动级联反应的“钥匙”,催化葡萄糖氧化,生成H_2O_2,消耗氧气,加剧缺氧肿瘤微环境,上调缺氧微环境中硝基还原酶(Nitroreductase,NTR),激活GOx/MIT@CS-PNZ-Cl级联缺氧响应,快速释放化药MIT;产生的H_2O_2能通过调节还原性微环境,减少肿瘤细胞中的GSH,抑制GSH介导的多药耐药蛋白(Multidrug resistance protein,MRP)外排MITselleckchem,提高化疗药物疗效,有效联合GOx“饥饿疗法”与化疗,实现抗肿瘤增效目的。经测定,GOx/MIT@CS-PNZ-Cl粒径为157.0±5.2 nm,表面电位为0.2±0.4m V,MIT载药量和包封率分别为16.37%和86.19%。体外缺氧条件下,缺氧敏感载体粒径变化及载药纳米粒药物释放测定结果显示,CS-PNZ-Cl骨架在缺氧条件下快速解体,载体粒径快速减小并加快药物释放。通过体外测定H_2O_2浓度及p H值变化,显示GOx复合至CS-PNZ-Cl表面后,酶催化活性无明显变化。GOx催化葡萄糖氧化,能生成H_2O_2,降低细胞内GSH,抑制GSH介导MIT外排;同时,GOx酶催化生化反应消耗氧气,加剧缺氧,上调NTR表达,激活细胞内缺氧敏感纳米粒级联响应。建立小鼠4T1乳腺癌动物模型,活体成像显示CS-PNZ-Cl能有效分布至肿瘤。GOx/CS-PNZ-Cl能构建早期肿瘤缺氧微环境,放大早期肿瘤组织与正常器官的缺氧差异,有效激活CS-PNZ-Cl级联缺氧响应,实现肿瘤部位特异性释药。模型动物药效学实验结果显示,优选制剂GOx/MIT@CS-PNZ-Cl抗肿瘤疗效最强,抑瘤率达到89.45%,且具有较好的生物安全性。NTR催化缺氧敏感响应,该过程为电子接收反应,硝基苯缺氧敏感键被还原,同时消耗大量还原性磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NAPDH),导致GSH及还原性硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)抗氧化系统失衡,GSH及还原性Trx含量降低,影响谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPx4)/GSH及GPx4/Trx通路,进一步抑制GPx4活性,降低细胞抗氧化能力,增敏铁死亡。PDT过程消耗氧气,加剧缺氧,能作为启动缺氧级联反应的初始刺激。进一步的研究通过PEG将光敏剂二氢卟吩e6(Chlorin e6,Ce6)嫁接至CS-PNZ-Cl的壳聚糖链,制备二氢卟吩e6修饰壳聚糖-硝基苯级联响应缺氧敏感嫁接物(Ce6modified chitosan grafted nitrobenzene,Ce6-CS-PNZ-Cl)。近红外光照,Ce6-CS-PNZ-Cl光动力治疗,迅速生成大量ROS,降低细胞内GSH含量,抑制GPx4活性,降低细胞抗氧化能力,诱导铁死亡发生;同时,该过程消耗氧气,加剧缺氧,激活Ce6-CS-PNZ-Cl级联缺氧响应,选择性消耗NAPDH,进一步抑制GPx4活性,增敏铁死亡。铁死亡能够诱导免疫原性细胞死亡(Immunogenic cell death,ICD),释放损伤相关分子模式(Damage associated molecular patterns,DAMP),激活肿瘤免疫效应,有效联合PDT与免疫疗法,实现抗肿瘤增效目的。粒径检测及荧光共振能量转移实验结果显示,体外缺氧条件下,Ce6-CS-PNZ-Cl能快速解体,具备缺氧敏感响应特性。近红外光照,ROS探针检测Ce6-CS-PNZ-Cl诱导ROS生成能力,显示Ce6嫁接至CS-PNZ-Cl后,光动力效应无明显变化,近红外光照,Ce6-CS-PNZ-Cl的4T1细胞毒性远高于Ce6。缺氧探针检测结果显示,Ce6-CS-PNZ-Cl光动力治疗,消耗氧气,加剧细胞缺氧。考察Ce6-CS-PNZ-Cl缺氧响应增敏铁死亡机制,结果显示NTR催化的Ce6-CS-PNZ-Cl缺氧响应,选择性消耗NADPH,抑制GSH、Trx抗氧化系统,减少细胞内GSH、还原性Trx和总硫量,抑制下游GPx4活性,增敏铁死亡。检测GPx4表达、脂质过氧化物水平及线粒体膜电位,结果显示,Ce6-CS-PNZ-Cl光动力治疗产生大量ROS,降低GSH,抑制GPx4活性,降低细胞抗氧化能力,造成脂质过氧化物积累,诱导铁死亡发生;PDT过程加剧缺氧,激活级联缺氧响应,消耗NADPH,进hereditary breast一步抑制GPx4活性,增敏铁死亡,脂质过氧化物积累增加,线粒体去极化。铁死亡能够诱导ICD,释放高迁移率族蛋白B1(High-mobility group box 1,HMGB1)及钙网织蛋白(Calreticulin,CRT),激活肿瘤免疫效应。建立小鼠4T1乳腺癌动物模型,活体成像显示Ce6-CS-PNZ-Cl具有比游离Ce6更高效的肿瘤组织分布。模型动物药效学研究结果显示,给药系统Ce6-CS-PNZ-Cl抗肿瘤疗效最强。免疫学机制研究显示,Ce6-CS-PNZ-Cl可有效提高肿瘤部位DCs活化,诱导较强的T细胞免疫反应,显著减少M2型巨噬细胞及髓系抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cell,MDSCs),缓解免疫抑制性微环境。
性别对冠心病患者PCI术后双联抗血小板治疗预后的影响
目的 明晰不同性别冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后双联抗血小板治疗(DAPT)对预后的影响。方法 本试验为回顾性研究，收集新里程安钢总医院2018年3月至2019年3月间收治的157例行PCI治疗患者的临床资料，所有患者PCI术后均接受DAPT1年，应用DAPT评分评估患者预后状况，分为预后良好LY-188011组(n=114)与预后不良组(n=43)。由研究人chemically programmable immunity员收集患者基线资料并记录研究所需资料，使用统计学方法比较两组患者基线资料，将差异具有统计学意义的因子作为自变量纳入并赋值，再经logistic回归分析检验是否为影响患者术后DAPT预后的相关危险因素。结果 两组患者年龄、文化程度、Others抑制剂居住地、身体质量指数(BMI)、婚姻状况、PCI手术时间、植入支架数、心功能分级、长期饮酒、长期吸烟、高血压、糖尿病、高脂血症、出院时视觉模拟评分法(VAS)评分、出院时急性生理学及慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分比较，差异无统计学意义(P> 0.05)；两组性别比较，差异有统计学意义(P <0.05)。Logistic回归分析发现，男性是PCI术后DAPT预后不良的影响因素，差异有统计学意义(OR=3.859,P <0.05)。结论 性别对冠心病患者PCI术后DAPT预后有一定影响，且男性冠心病患者PCI术后DAPT预后不良的风险大于女性。