雷帕霉素对人红白血病HEL细胞外泌体及PD-1/PD-L1的影响

目的 探讨雷帕霉素(Rapa)对JAK2 V617F阳性HEL细胞外泌体中JAK2、ABCA3及免疫检查点PD-1/PD-L1的影响。方法 体外培养人红白血病HEL细胞(JAK2 V617F阳性),分别加入浓度为10、50和100 nmol/L的Rapa,设立对照组。CCK-8检测细胞增殖抑制率,最终确定细胞增殖抑制率选用浓度为10及50 nmol/L的Rapa干预细胞。外泌体试剂盒提取外泌体,Western blot及流式细胞术鉴定外泌体,荧光定量PCR检测外泌体中JAK2、ABCA3和PD-1、PD-L1 mRNA变化,流式细胞术检测外泌体PD-Angiogenesis抑制剂1/PD-L1蛋白表达。结果 外泌体试剂盒提取的外泌体均表达特征性的CD9、CD63、CD81蛋白,Automated Microplate Handling Systems符合外泌体一般特征。HEL细ABT-199半抑制浓度胞外泌体中能够检测到JAK2 mRNA;Rapa能够减少HEL细胞外泌体产生,剂量依赖性降低外泌体中JAK2、ABCA3及PD-L1 相对表达量,抑制外泌体PD-L1蛋白表达,对PD-1蛋白表达无明显影响。结论 HEL细胞可能通过外泌体传递JAK2突变基因信号,Rapa能够减少外泌体产生,进而抑制外泌体传递JAK2突变信号,抑制PD-L1蛋白表达。