目的:通过干预微管动态重组揭示微管调控糖皮质激素受体α(Glucocorticoid receptorα,GRα)核转运的机制与激素性股骨头坏死兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化之间的关系,并探讨生骨再造丸在其中的干预作用。方法:(1)选择12只新西兰大白兔,采取随机分组的形式分为2组,其中空白组6只,利用生理盐水灌胃,实验组6只,利用生PR-171骨再造丸灌胃1周,耳中动脉采血,提取空白血清、含药血清。(2)采用前期实验冻存的兔BMSCs,P3代用于实验,复苏培养BMSCs后,将其分为空白组、模型组、紫杉醇组、诺考达唑组、模型+生骨再造丸含药血清组;采用1u M地塞米松干预48h进行细胞造模,茜素红染色法进行验证;采用RT-PCR、WB检测α-tubulin、AC-α-tubulin、GRα、BMP-2在BMSCs中的表达;采用激光共聚焦显微镜观察AC-α-tubulin、GRα变化及细胞内的定位;ALP法检测不同组的BMSCs成骨分化水平。结果:(1)BMSCs复苏形态观察:复苏以后的BMSCs形态呈现出梭形,直径比较小,增殖稳定,并且生长速度比较快,整体形状呈现出团簇状或者放射状,细胞之间的空隙比较小,培养瓶中的细胞密度非常高,复苏以后的3-5天,填充到整个瓶底,能够进行传代或者后续试验。(2)细胞造模验证:BMSCs成骨诱导后采用茜素红染色法验证,空白组橘红色阳性结节数量增加,模型组比较橘红色阳性结节数量明显下降,表明造模完成。(3)q RT-PCR检测结果:模型组中α-tubulin、GRα的表达均高于空白组(P<0.01),BMP-2表达低于空白组(P<0.01);药物组、诺考达唑组中α-tubulin、GRα的表达均低于模型组(P<0.05),BMP-2表达高于模型组(P<0.01);紫杉醇组中α-tubulin、GRα的表达均高于模型组(P<0.01),BMP-2表达低于模型组(P<0.01)。(4)WB检测结果:模型组中α-tubulin、AC-α-tubulin、GRα的表达高于空白组(P<0.01),BMP-2表达低于空白组(P<0.01);药物组、诺考达唑组中α-tubuselleck合成lin、AC-α-tubulin、GRα的表达均低于模型组(P<0.05),BMP-2表达高于模型组(P<0.01);紫杉醇组中α-tubulin、AC-α-tubulin、GRα的表达均高于模型组(P<0.05),BMP-2表达低于模型组(P<0.01)。(5)细胞核GRα与细胞质GRα蛋白量比:模型组显著高于空白组(P<0.01);药物组、诺考达唑组低于模型组(P<0.01);紫杉醇组超过模型组,二者之间的差异具备显著的统计学意义(P<0.01)。(6)BMSCs的成骨分化情况:模型组相比于空白组钙盐沉积显著降低,诺考达唑组相比较模型组钙盐结节数量显著增加,药物组相比较模型组钙盐沉积明显上升,紫杉醇组相比较模型组钙盐沉积略有下降。(7)激光共聚焦显微镜观察各组BMSCs中AC-α-tubulin及核GRα的变化:(1)AC-α-tubulin:模型组比空白组荧光强度更高、排列致密(P<0.01);药物组、诺考达唑组比模型组荧光强度更低、排列稀疏(P<0.05);紫杉醇组比模型组荧光强度更高、纤维排列更致密(P<0.01)。(2)核GRα:模型组比空白组的荧光强度升高(P<0.01);药物组、诺考达唑组比模型组荧光强度明显降低(P<0.05);紫杉醇组比模型组荧光强度明显增高(P<0.05)。(8)ALP在BMSCs各组的表达状况:模型组小于空白组(P<0.01);药物组与诺考达唑组明显超过模型组(P<0.01);紫Prior history of hepatectomy杉醇组小于模型组,二者之间的差异具备显著的统计学意义(P<0.05)。结论:(1)微管调控GRα核转运机制的激活,导致BMSCs成骨分化能力降低,是激素性股骨头坏死发病的关键机制。(2)生骨再造丸通过调控微管动态重组抑制GRα的核转运,促进BMSCs成骨分化,是其治疗激素性股骨头坏死的潜在分子机制。