青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化的影响及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节作用

目的:观察青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化的影响及Toll样受体/髓样分化因子88/核因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的调节作用。方法:采用MTT法测定青钱柳三萜对3T3-L1细胞增殖活性的影响,油红O染色分析3T3-L1细胞脂肪积累,生化法检测3T3-L1细胞中总胆固醇(TC)、三酰甘油 (TG)的含量,ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-4和IL-10含量,Real-time PCR法测定细胞中TLR4、MyD88、NF-κBp65、TNF-α、IL-1β、IL-6、selleckchem PF-07321332IL-4和IL-10 mRNA表达,Western blot 法测定细胞中TLR4、MyD88、核因子κB抑制RAD001因子α(IκBα)、p-IκBα、核因子κB抑制物激酶β(IKKβ)、p-IMedication for addiction treatmentKKβ及胞质和胞核中NF-κBp65蛋白表达。结果:青钱柳三萜可显著抑制3T3-L1细胞中脂质积累,降低细胞中TC、TG含量及上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,升高上清液中IL-4和IL-10含量,降低细胞中TLR4、MyD88、NF-κBp65、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达和TLR4、MyD88及胞核中NF-κBp65蛋白表达和p-IκBα/IκBα、p-IKKβ/IKKβ比率,升高细胞中IL-4、IL-10 mRNA表达和胞质中NF-κBp65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:青钱柳三萜对3T3-L1细胞成脂分化具有良好的抑制作用,其作用机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活、减轻脂肪细胞炎症反应、抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、TC、TG生成和脂质积累,促进IL-4、IL-10生成有关。以上结果显示了青钱柳三萜在肥胖防治上良好的应用前景。