寻找诱发最弱免疫不良反应的肿瘤特异性靶点,是目前肿瘤研究领域中的热点和前沿。研究发现,人类CC趋化因子受体8(CCR8)是癌症免疫疗法、自身免疫性疾病的有很大潜力的药物靶点。CCR8~+Tregs在多种癌症肿瘤表达上调,是免疫抑制的驱动因素。CCR8在肿瘤微环境中的辅助T细胞、细胞毒性T细胞,及邻近正常组织中的T细胞中表达微乎其微。具有细胞毒性活性的CCR8抑制性抗体,可特异性识别并消除与肿瘤相关的Tregs。但CCR8在肿瘤中发挥作用机Prebiotic amino acids制,还需进一步研究。因此,CCR8单克隆抗体的研究,可探究肿瘤免疫治疗以及CCR8依赖性的未知机制。故本课题采用mRNA免疫小鼠的方式制SBE-β-CD备杂交瘤细胞,纯化得到CCR8抑制性的单克隆抗体22H9。论文主要研究如下。1.mRNA免疫小鼠制备杂交瘤细胞。本课题由于目标靶点蛋白跨膜构象特性,采用经LNP(Lipid nanoparticle)修饰的mRNA对小鼠进行免疫。免疫小鼠后ELISA、FACS检测血清效价,10只小鼠均有效价,表明mRNA免疫具有可行性,取效价最高小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合铺板,得到2800株杂交瘤细胞。ELISA、FACS筛选出效价最高两株进行亚克隆铺板,得到42株单克隆杂交瘤细胞,ELISA、FACS筛选表达最高的22H9-7扩大培养。2.可视化HEK293-cAMP-biosensor-CCR8细胞动态检测模型建立。通过慢病毒感染方式将cAMP-biosensor,CCR8基因构建到HEK293细胞株。CCR8受体成功调控cAMP信号通路,并通过Glo Sensor技术实现了细胞内cAMVorinostat体外P含量可视化动态检测。3.CCR8抑制性单克隆抗体的制备与功能研究。通过蛋白纯化细胞上清,得到CCR8抑制性的单克隆抗体22H9,SDS-PAGE检测纯度高,ELISA、FACS均显示高特异性。22H9成功调控cAMP信号通路,在细胞动态检测模型中表现良好CCL1-CCR8阻断性。ADCC、ADCP实验结果显示该抗体具有优良抗肿瘤活性。综上所述,本研究实现mRNA免疫小鼠,为CCR8开发了一种新的抑制性单克隆抗体,并验证了该抗体的生物活性。构建可视化细胞检测模型,实现了抗体功能动态化检测。为探究CCR8靶点与肿瘤免疫的关系,进一步开发此靶点在肿瘤治疗中应用提供更多选择。