黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)作为一种有效的免疫激活剂,已广泛应用于水产养殖业中,但其发挥作用的机制尚不清楚。本文首先建立了福尔马林灭活溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)诱导的大黄鱼(Larimichthys crocea)巨噬细胞炎症模型,通过对分离的大黄鱼原代巨噬细胞(prima获悉更多ry head kidney macrophages,PKM)进行1×10~3、1×10~4、1×10~5、1×10~6和1×10~7cfu/m L的灭活溶藻弧菌梯度处理实验,发现灭活溶藻弧菌可以显著降低PKM细胞活性,并在1×10~6cfu/m L时达到半致死剂量。同时通过流式细胞术检测发现,1×10~6cfu/m L的灭活溶藻弧菌可以显著诱导PKM活性氧的产生和细胞凋亡的发生,表明灭活溶藻弧菌可以诱发PKM产生细胞损伤。然而,当用50、100、200、400和800μg/m L的APS预处理PKM 24 h后,再经灭活溶藻弧菌诱导,发现细胞活性的降低被显著改善,并且当APS的浓度达到200μg/m L时对灭活菌诱导的细胞毒性的抑制效果趋于稳定,进一步检测活性氧生成量和细胞凋亡发现二者也被显著抑制。同时,荧光定量PCR检测发现,通过灭活菌及APS预处理后,在4 h时灭活菌诱导PKM炎症因子IL-1β和IL-6上调表达的效果最显著,且此时APS对其诱导的炎症反应的抑制效果也同样最明显。故选取4 h这一时间点的样品进行转录组测序,进一步深入探究APS的保护机制。转录组测序结果表明,在用灭活溶藻弧菌处理后,PKM中免疫相关基因(TLR5s、TLR13、Clec4e、IKK、IκB、BCL-3、NF-κB2、REL、IL-1β和IL-6)和细胞焦亡相关基因(caspase-1、NLRP3和NLRC3)的表达显著上调。而用APS预处理后,上述上调的基因基本都被抑制,其中TLR5s、BCL-3、REL、caspase-1、NLRP12、IL-1β和IL-6与灭活菌处理组相比显著下调。进一步通过体外试验发现灭活菌处理后,PKM细胞出现明显的溶胀现象,PI染色证明细胞膜完整性的丧失,LDH释放检测表明细胞培养液上清液中LDH含量显著增加。而经APS预处理后,这些现象均被有效缓解。本研究结果表明,APS能够保护大黄鱼PKM免受灭活溶藻Labral pathology弧菌诱导的炎症损伤,转录组学分析初步揭示其可能LY2157299通过抑制灭活菌激活的NF-κB和细胞焦亡信号通路发挥抗炎作用,进一步通过体外试验证实APS确能抑制灭活溶藻弧菌引起的PKM细胞焦亡。本研究有助于揭示APS在鱼类中发挥免疫调节作用的机制,并为APS在预防和控制鱼类细菌性疾病中的推广应用提供理论基础。