靶向催乳素受体的嵌合抗原受体T细胞制备条件的优化

嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞疗法已成为恶性肿瘤治疗领域内的研究重点，催乳素受体(PRLR)也被证明其过表达会影响乳腺癌的发生与发展，是乳腺癌治疗的潜在靶点。本研究建立了三质粒系统[pHIV-绿色荧光蛋白(GFP)、psPAX2、pVSVG]包装慢病毒，并将其应用于新构建的靶向PRLR的CAR慢病毒表达载体，通过进一步优化慢病毒制备条件，测定慢病毒滴度，成功构建了靶向PRLR的CAR-T细胞。结果表明，制备慢病毒的selleck HPLC最优条件为：PRLR-CAR∶psPAX2∶pVSVG质量比为3∶2∶1，且和转染试剂以质量比1∶2混合，经浓缩后滴度可达到1.88×10~7 TU/ml。以此慢病毒感染人T细胞，并经终浓度0.5 μg/ml嘌呤霉素Modern biotechnology筛选2 d后可得到CD4阳性表达率约为55%，CD8阳性表达率约为35%的CAR-T细胞，且PRLR-CAR阳性表达率大于50%。构建SBE-β-CD生产商的新型靶向PRLR的CAR-T细胞可为乳腺癌的免疫治疗提供参考。