通过定点突变提高纳豆激酶纤溶活性和热稳定性

纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种纤溶酶，可溶解血栓，常用于治疗心血管疾病(CVDs)。然而，野生型NK往往表现出很少的纤溶能力和较低的热稳定性，针对如何提高NK的热稳定性和活性开展研究。使用重叠延伸PCR法将NK中位于194位的Ser替换为Pro,为验证突变后的热稳定性，将野生型NK和突变体S194P均在不同温度下孵育相同时间Cobimetinib生产商，使用纤维蛋白板法测定二者酶活，验证热稳定性。成功构建了pET-26b-NK_(s194p),测量酶活结果显示，野生型NK和突变体S194P酶活分别达到1selleck NMR01.30 IU/mL和123.23 IU/mL,结果表明突变体S194P的酶活比野生型NK高(18.10±2)%,将野生型NK和突变体S194P在60～65℃温度下孵育30 min后测量酶活，野生型NK在63℃时丧失酶活，突变体S194P在65Oral probiotic℃时丧失酶活，耐热温度提高2℃。结果表明，突变体S194p的蛋白结构在突变后发生了改变，使NK提高了耐热温度。