随着基因工程技术的不断发展,经过改造后的病毒可以作为溶瘤病毒广泛应用于恶性肿瘤的治疗,目前已有研究证明溶瘤腺病毒在临床使用中的安全性,它可以选择性在肿瘤组织中复制,有效的裂解肿瘤细胞,并诱导肿瘤炎症和抗肿瘤免疫反应,另外溶瘤腺病毒也非常适合插入外源基因,以更有效的利用和放大病毒的抗肿瘤效果,是目前用于癌症免疫治疗较为理想的工具。MARCO是巨噬细胞上具有胶原结构域的一种清道夫受体,其属于清道夫受体家族A类,表达于淋巴结、肝脏、脾等特定巨噬细胞亚群上。MARCO通过识别广泛的配体,包括外源性的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌细胞壁、内源性的Ox-LDL、ac-LDL、凋亡细胞、肿瘤细胞等,发挥介导巨噬细胞摄取并清除病原体及肿瘤细胞的作用。目前关于MARCO在疾病方面的研究主要是阿尔GSK1120212茨海默症、动获悉更多脉粥样硬化等疾病,关于癌症进程中MARCO的作用知之甚少。近来,有研究发现肝癌细胞表达MARCO能够通过抑制肝癌细胞侵袭和迁移并促进肝癌细胞凋亡发挥肿瘤抑制作用,但是关于表达MARCO的肿瘤细胞对肿瘤免疫微环境的调节和免疫机制尚不清晰。针对上述问题,本文的主要目的是:在课题组前期基础上,构建一种表达鼠源MARCO基因的重组溶瘤腺病毒,并考察其抗肿瘤活性和在肿瘤微环境中的免疫调节作用。论文首先利用课题组前期保存的溶瘤腺病毒(CRAd)相关表达载体,通过同源重组插入MARCO外源基因,构建出p DC316-m MARCO-GFP-dl24E1穿梭载体,随后与5型腺病毒(Ad5)骨架质粒包装出CRAd5-m MARCO重组溶瘤腺病毒。经过筛选、扩增和纯化后,通过一系列体外实验验证了重组病毒的肿瘤杀伤作用:通过细胞毒性检测发现CRAd5-m MARCO对多种肿瘤细胞系Lewis、Hepa1-6、CT26、4T1均有杀伤效果,对小鼠正常细胞3T6则没有明显的杀伤,体现出了良好的安全性。Enfermedades cardiovasculares随后,流式细胞术分析发现CRAd5-m MARCO可以明显地促进鼠肺癌细胞Lewis及肝癌细胞Hepa1-6的凋亡,并通过细胞划痕实验证明了CRAd5-m MARCO具有抑制细胞迁移的效果。之后,我们通过q RT-PCR检测了重组病毒的体外免疫激活能力,结果发现在Lewis模型中CRAd5-m MARCO可以明显上调细胞内抗肿瘤相关的细胞因子TNF-α、IL-6、IL-18、IL-23、CXL10表达含量。这些结果提示,CRAd5-m MARCO可用于肺癌和肝癌等肿瘤的治疗。最后,通过建立Lewis免疫全能荷瘤小鼠模型,进一步探究了CRAd5-m MARCO在体内的抗肿瘤作用以及免疫调节机制。结果表明,相比于PBS对照组,瘤内注射CRAd5-m MARCO显著抑制了肿瘤的生长,通过流式细胞术分析瘤内免疫细胞组成发现,CRAd5-m MARCO治疗能明显增加淋巴细胞的浸润和CD4~+T细胞、CD8~+T细胞的激活,并且提升了M1型肿瘤相关巨噬细胞的数量。后续我们将通过建立适合的模型,进一步分析CRAd5-m MARCO在体内抑制肿瘤转移等作用,并全面考察溶瘤腺病毒表达m MARCO的抗肿瘤机制及安全性。本论文的研究为进一步理解MARCO的抗肿瘤免疫调节作用以及溶瘤腺病毒的免疫治疗应用提供了依据。