表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定

【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒，为selleck合成探索猪痘病毒（SPV）作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成了非洲猪瘟病毒B646L基因，克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28，构建重组转移质粒pUSG11/P28-B646L，经脂质体介导转染预先感染猪痘病毒的PK15细胞，出现病变后通过绿色荧光标记筛选和纯化重组病毒。拯救的重组病毒经PCR和基因测序鉴定后，通过Western blotting和间接免疫荧光试验检测p72蛋白的表达情况，并测定重组病毒的增殖特性和遗传稳定性。【结果】重组转移质粒pUSG11/P28-B646L在PK15细胞内和SPV成功进行了同源重组，纯化得到的重组病毒含有B6Influenza infection46L基因，且基因序列正确。Western blotting和间接免疫荧光试验结果表明，重组病毒rSPV-B646L在PK15细胞中能表达非洲猪瘟病毒p72蛋白，表达的蛋白大小正确，且能与p72单克隆抗体发生特PUN30119体内实验剂量异性反应。一步生长曲线显示，重组病毒与亲本病毒的增殖特性没有明显差异。重组病毒在PK15细胞上连续传15代后，插入的外源基因没有发生突变或缺失。【结论】本研究以SPV为载体，成功构建了正确表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒，重组病毒在PK15细胞中有良好的遗传稳定性，B646L基因的插入没有影响重组病毒在PK15细胞上的增殖能力，表达的p72蛋白具有反应原性。本研究的成果为非洲猪瘟多基因重组猪痘病毒载体疫苗的研发奠定基础。