糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)俗称平菇,是位居我国产量第三位的可食用大型真菌,其产量和质量直接影响农户的经济利益,因此,平菇子实体生长发育过程也成为研究者的关注热点。前期研究发现转录因子Po ZCP26促进糙皮侧耳子实体发育,本研究以糙皮侧耳野生型(WT)与Po ZPC26的两个过表达菌株(OE3、OE5)三个RNA干扰菌株(Ri2、Ri12、Ri15)为材料,通过高通量测序分析了六个菌株的菌丝体(M)、原基(P)、子实体(F)转录组数据,筛选出与子实体发育相关且受Po ZCP26调控的下游关键基因,进一步利用RT-q PCR检测关键基因的相对表达量,通过根癌农杆菌转化法构建关键基因的过表达突变体,验证关键基因对糙皮侧耳生长发育的影响。试验具体结果如下:1、分析转录组数据和比较组合交集(正调控比较组WT-MP-up VS OE3-MP-up VS OE5-MP-up VS Ri15-MP-down,负调控比较组WT-MP-down VS OE3-MP-down VS OE5-MP-down VS Ri5-MP-up),以FC(fold change,FC)≥2,p-Value<0.05筛选得到正调控M到P发育时期且受Po ZCP26正调控的基因有54个,负调控M到P时期发育且受Po ZCP26负调控的基因51个,最终筛选出7个关键基因(g11718、g11781、g4216、g3416、g14CL13900生产商38、g4751、g5090),通过荧光定量PCR,验证得到基因相对表达量与转录组数据趋势一致,选择其中两个基因(g11718、g1438)进行下一步研究。2、以野生型菌丝时期(WT-M)c DNA为模板,PCR克隆两个关键基因(g11718、g1438)c DNA片段,采用infusion连接法连接到过表达载体Po-gpd OE,成功构建两个关键基因的过表达载体,测序无误后用根癌农杆菌介导的转化法(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)将过达载体转化到糙皮侧耳野生型菌株(WT)中,用PCR筛选到每个关键基因4个阳性转化子。采用RT-q PCR检测关键基因的相对表达量,选择表达量升高的阳性转化子作为过表达突变体,分别是OE11718-1、OE11718-3、OE1438-1、OE1438-10。3、两个关键基因的过表达突变体菌株对糙皮侧耳平板菌丝生长及热耐受能力的影响结果发现,在PDA平板上28℃培养时,过表达菌株菌丝生长速度显著快于野生型菌株,37℃热激期间,过表达菌株菌丝生长速度均显著慢于野生型菌株,而热激后恢复期间,过表达菌株菌丝生长速度显著高于野生型菌株。说明11718和1438这两个基因对菌丝适温生长具有促进作用,但在热激下抑制菌丝生长。PD0325901体内4、两个关键基因的过表达突变体菌株对糙皮侧耳子实体生长发育的影响结果发现,培养料Plant genetic engineering菌丝生长及原基时期,过表达菌株生长速度显著快于野生型菌株,并且形成原基数量略高;子实体幼菇时期,过表达菌株菌盖形状畸形,菌盖表面有不规则的凸起,这些结果表明11718和1438这两个基因对菌盖形状和表面发育起负调控作用。