神经酸(Nervonic acid)是大脑神经纤维以及菌膜的重要组成成分,可以修复和保护神经细胞。但同时神经酸也存在水溶性差、生物利用率低等问题,限制了其进一步的应用。因此,探索提高神经酸水溶性、增加其生物利用genetic immunotherapy度的研究具有重大意义。本研究以神经酸为研究对象,通过分离纯化制备得到神经酸,以壳寡糖、丝素蛋白为微载体包埋神经酸制备水溶性微粉。设计模拟体外释放实验和贮藏稳定性实验,研究了神经酸微粉的特性,结合扫描电镜、热分析、X射线衍射、红外及体外抗氧化等技术手段对神经酸微粉进行表征。最后,采用淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))处理神经元细胞(HT22)建立阿尔茨海默症细胞模型,从细胞水平探讨药物抗AD的作用机制。神经酸的分离纯化工艺研究。分离纯化工艺中首先,对元宝枫种仁油进行皂化处理得到混合脂肪酸。以皂化率为评价指标,采用单因素实验和正交实验优化脂肪酸皂化工艺,得到最佳皂化工艺参数为:A_2、B_2和C_2(皂化时间为3 h,用碱量为10%,皂化温度为80°C)。在此条件下,三次平行验证实验所获得元宝枫种仁油皂化率为75.83%±3.79。运用分子蒸馏技术,对皂化所得混合脂肪酸进行纯化处理,以神经酸含量为评价指标,采用单因素方法和正交实验设计法富集神经酸,并优化神经酸纯化工艺。元宝枫神经酸纯化的最优工艺为:A_3、B_3、C_2和D_3(刮板转速为200 r/min,蒸馏温度为240°C,压力为100 Pa,进料速度为10 m L/min)。在此条件下,三次平行验证实验所获得元宝枫神经酸纯度为35.49%±1.78。神经酸水溶性微粉PF-07321332采购(NA-WM)的构建及工艺优化。采用层层自组装技术(LBL),以神经酸作为基材,良好生物相容性的天然高分子化合物壳聚糖和丝素蛋白为壁材,通过单因素优化实验制备出具有水溶性的核-壳型(神经酸/丝素蛋白/壳聚糖)微粉,运用Box-Behnken对NA-WM构建工艺最优因素进行筛选。得到NA-WM的最佳制备工艺为:壳寡糖固液比为1:2 g/m LDinaciclib、包合速度为6500 r/min、包合时间为15 min、旋蒸温度为60℃、神经酸-壳寡糖包合物与丝素蛋白质量比为1、乳化速度为7500 r/min、乳化时间为15 min,进行3次平行实验,NA-WM的粒径为446 nm,与Box-Behnken预测值相差小于26。对采用层层自组装技术构建得到的NA-WM,进行热重分析、X射线衍射分析和红外光谱分析,发现壳寡糖和丝素蛋白成功封装神经酸得到水溶性微粉。检测得到酸环境响应的NA-WM水溶率为96.03%,说明以神经酸作为基材,壳聚糖和丝素蛋白为壁材,通过层层自组装技术制备的神经酸水溶性复合微粉具有良好的水溶性;扫描电镜图像显示制备得到的微粉粒子形态呈球形,平均粒径为420±35 nm,电位为-28.81±1.44 m V、包封率为88.11%,载药量28.27%。对NA-WM贮藏稳定性和体外释放特进行评价,结果表明NA-WM具有提高神经酸的贮藏稳定性的作用;酸环境是NA-WM的主要响应环境,自组装微粒具有显著的缓释作用。神经酸水溶性微粉的体外抗氧化活性检测。对制备的NA-WM以及原料本身进行体外抗氧化活性检测。结果表明NA-WM具有较强的综合抗氧化活性。神经酸水溶性微粉的体外活性研究。对制备的酸环境响应NA-WM进行体外抗AD作用机制表征,开展了细胞毒性分析、线粒体膜电位测定、细胞形态学分析、Aβ诱导损伤抑制作用、细胞CAT分析、细胞SOD分析、细胞MDA含量分析、细胞ROS抑制作用、细胞GSH-PX酶分析、AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡分析等活性检测,表明NA-WM能显著增强Aβ_(1-42)诱导损伤的HT22细胞的活力,可以明显降低受损HT22细胞产生的ROS的含量,抑制活性氧的积累,改善线粒体功能。