肝癌是常见的恶性肿瘤之一,我国是世界上肝癌发病率、死亡率最高的国家。探索肝癌的诊断和治疗,有利于提高我国人民的健康水平以及降低肝癌造成的疾病负担。本课题组前期研究发现,来源于抗肿瘤中药鹅不食草Centipeda minima L.的短叶老鹳草素(BrevilinA,BA),对包括三阴性乳腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、结肠癌等多种肿瘤都有很好的抑制活性,但目前还尚未有将短叶老鹳草素应用于抗肝癌方面的研究报道。因此,本文旨在对短叶老鹳草素体外和体内抗肝癌的活性进行研究,并对其作用机制作探讨。本论文采用MTT实验考察BA对肝癌细胞HepG2、Huh7、Hep3B和PLC/PRF/5细胞活性的抑制作用;采用集落形成实验考察BA对肝癌细胞HepG2、Huh7和PLC/PRF/5细胞增殖的抑制作用;采用Transwell迁移和侵袭实验考察BA对HepG2和Huh7细胞迁移和侵袭能力的抑制作用;采用流式细胞术考察BA对HepG2和Huh7细胞周期的阻滞作用;采用Western Blot实验考察BA对HepG2和Huh7细胞周期相关蛋白表达的影响;采用流式细胞术考察BA对HepG2和Huh7细胞凋亡的诱导作用;采用裸鼠皮下接种人肝癌细胞Huh7的动物模型考察BA对体内Huh7细胞增殖的抑制作用;采用H&E染色法考察BA对肿瘤组织和主要adult medulloblastoma器官的影响;采用RNA-sequenCHIR-99021体外ce与Western Blot实验考察BA抗肝癌的作用机制。体外实验结果表明,BA可以抑制HepG2、Huh7、Hep3B和PLC/PRF/5细胞的生长,抑制HepG2、Huh7和PLC/PRF/5细胞的集落形成能力,抑制HepG2和Huh7迁移和侵袭的能力,将HepG2和Huh7的细胞周期阻滞于G2/M期,并诱导HepG2和Huh7细胞凋亡。体内实验结果表明,在裸鼠皮下接种人肝癌细胞Huh7的动物模型中,BA可以显著抑制肝癌肿瘤的生长,并对裸鼠体重无明显影响。H&E染色结果显示,selleckchem PUN30119给药组裸鼠的肿瘤组织产生了明显的细胞间隙、细胞核颜色变淡、核仁体积缩小、坏死面积增大;而给药组裸鼠的心、肝、脾、肺、肾与阴性对照组相比,均无明显组织损伤和病变,这表明BA可抑制肿瘤的体内生长,且生物安全性良好。机制研究表明,BA诱导细胞周期阻滞与下调周期相关蛋白cdc2和CDK6有关。进一步采用RNA-sequence与Western Blot实验发现,BA可以促进MAPK信号通路的表达,并且抑制mTOR和STAT-3信号通路的表达。综上所述,BA在体外对多种肝癌细胞表现出抑制活性,可以阻滞细胞周期、诱导凋亡、抑制迁移和侵袭;同时,对荷瘤裸鼠体内肿瘤的生长有显著抑制作用,且无明显毒性。作用机制研究初步发现,BA抗肝癌的活性与上调MAPK信号通路和抑制mTOR和STAT-3信号通路有关。本论文的完成,为未来将BA应用于肝癌的防治提供了理论基础。