白驳1号方治疗白癜风的临床观察及沙苑子苷、地黄梓醇对黑素细胞铁死亡的机制研究

目的:1.观察白驳1号方治疗白癜风的临床疗效,并研究其作用机制。2.应用中医传承辅助平台分析白癜风中医用药规律。3.应用网络药理学和分子对接对白癜风常用中药进行分析,发掘与铁死亡及白癜风发病相关的因子,并进行分子对接。4.使用RSL-3在黑素细胞中构建铁死亡状态,从铁死亡角度观察黑素细胞变化,完善白癜风的发病机制,并探究ICI 46474配制沙苑子苷和地黄梓醇的作用靶点。方法:1.临床研究:最终纳入60例经临床确诊的白癜风患者,随机分为两组。治疗组给予白驳1号方口服,对照组给予白灵片口服,两组常规治疗为复方卡力孜然酊外涂。观察结束后,进行临床疗效判定。2.白癜风用药规律分析:本研究中纳入既往在山东中医药大学附属医院治疗的白癜风患者,收集纳入患者的临床处方,并将患者的处方按照中医传承辅助平台V3.0的格式要求进行处理。3.网络药理学和分子对接部分:对白癜风及沙苑子苷和地黄梓醇进行网络药理学分析,并对小分子和靶蛋白进行分子对接。4.实验研究:以正常人黑素细胞为研究对象,对黑素细胞设置不同浓度梯度的铁死亡诱导剂RSL-3、沙苑子苷和地黄梓醇。实验分为为对照组、RSL-3组、RSL-3+沙苑子苷组、地黄梓醇+RSL-3组和地黄梓醇+沙苑子苷+RSL-3组,并对黑素细胞进行相应的观察和检测。结果:1.临床研究结果:治疗组白斑复色率分别为4.81%、9.37%、21.88%、38.23%、65.45%、73.38%,对照组分别为0.71%、4.52%、8.34%、23.5%、35.29%、57.02%,两组白斑复色率比较,差异均有统计学意义(p<0.05)。治疗组总有效率分别为44.4%、63.0%、71.2%、86.4%、87.70%、88.9%,对照组总有效率分别为14.3%、27.2%、51.9%、66.70%、79.0%、81.5%。治疗组愈显率分别为0%、2.5%、11.1%、33.3%、61.7%、71.6%,对照组愈显率分别为0%、3.6%、3.6%、22.6%、22.6%、48.1%。两组疗效比较,有显著性差异(p<0.05)。2.白癜风用药规律分析:白癜风患者处方中药物中炙甘草出现的频次最高为93次,其次是生地黄和盐沙苑子,出现频次分别为87和84次。白癜风患者处方中药物组合出现次数最高的为炙甘草和生地黄、炙甘草和沙苑子,分别为86次和82次。3.网络药理学和分子对接研究结果:TP53是沙苑子苷和地黄梓醇及白癜风的关键蛋白,对接结果表明小分子均能进入靶蛋白的活性中心。4.实验研究结果:(1)沙苑子苷和地黄梓醇无论是单独还是联合使用,都能对RSL-3诱导的黑素细胞的生长抑制起到拮抗作用。(2)沙苑子Hepatoblastoma (HB)苷联合地黄梓醇可改善氧化应激状态下黑素细胞的线粒体形态,但是对功能障碍改善不明显。(3)沙苑子苷和地黄梓醇单独或者联用都可以显著降低RSL-3诱导的铁离子水平和黑素细胞ROS。(4)沙苑子苷和地黄梓醇通过增加SLC7A11和GPx4的表达,降低BMN 673价格TP53和TFR1的表达来保护黑素细胞。结论:1.白驳1号方治疗白癜风疗效确切,无不良反应。2.生地黄和沙苑子为白驳1号方治疗白癜风的主要组合。3.TP53为白癜风的关键蛋白,对接结果表明小分子均能进入靶蛋白的活性中心。4.沙苑子苷和地黄梓醇能够改善和保护由RSL-3诱导的铁死亡参与的氧化应激状态下的黑素细胞。