白三叶(Trifolium repens L.)是一种重要的豆科牧草,广泛分布于温带及亚热带地区。低温胁迫是限制其生长和生产的主要环境因素,目前在生理和分子Technological mediation水平上对其耐寒性知之甚少。为深入探究Dinaciclib浓度白三叶的低温响应机制,本研究以白三叶为实验材料,对其采取不同胁迫时间的4℃低温处理E-616452 molecular weight,分析低温胁迫下白三叶的生理变化特征,继而采用转录组测序的方法,系统解析白三叶在低温胁迫下的分子机制。为揭示白三叶低温响应的生理和分子调控机理提供理论依据,并为促进白三叶抗寒性品种选育奠定基础。主要研究结果如下:1.白三叶响应低温胁迫的生理生化分析对白三叶幼苗进行低温胁迫处理,发现CAT酶活性随着胁迫时间的延长呈先升后降趋势,叶绿素含量呈现逐渐降低的趋势,POD和相对电导率均随着胁迫时间的延长而升高,在72 h时达到最大值,且相对电导率整体差异显著。说明相对电导率可以作为白三叶响应低温胁迫的参考指标,其变化趋势和幅度在一定程度上能够反映白三叶对低温胁迫的抵抗能力。2.白三叶响应低温胁迫的转录组分析为了建立白三叶在低温胁迫下的转录谱,本研究对白三叶进行了转录组分析。经过序列拼接、基因功能注释和差异表达分析,发现了5273个差异表达基因,GO富集分析发现差异表达基因主要富集到了氧化还原酶活性、转录调节活性和金属离子结合等过程,进一步分析发现,MYB、AP2/ERF、C2H2和b HLH等转录因子在白三叶低温胁迫过程中发挥了关键作用。3.白三叶响应低温胁迫的基因共表达网络分析利用WGCNA鉴定出34个共表达模块,其中10个为白三叶特异性模块。选取与低温胁迫正相关的darkmagenta模块进行深入分析,GO注释分析结果表明,darkmagenta模块主要显著富集到蛋白激酶活性、DNA结合转录因子活性等代谢过程,进而对该模块内的基因进行共表达网络构建,筛选出可能与低温胁迫密切相关的核心基因,其中以CDPK、WRKY、AP2/ERF、RLK为主。4.白三叶响应低温胁迫的CDPK的鉴定与表达选取8个与低温相关的差异共表达基因进行了实时荧光定量PCR的验证,结果表明,选取的差异共表达基因在低温处理白三叶叶片组织中的表达变化趋势和转录组测序结果保持一致,验证了转录组测序结果的准确性和可靠性。