由应激引起的炎症反应是当前家禽养殖业的一大难题,持续的炎症刺激是导致家禽免疫力降低、死淘率增高的重要原因之一,对家禽养殖业造成了巨大的经济损失。课题组前期通过转录组测序技术开展了糖皮质激素诱导的应激反应对鸡免疫器官基因表达影响的研究,发现MyD88基因通过TLR4/MyD88信号通路对应激状态下家禽免疫器官功能具有潜在调节作用。因此,MyD88基因在家禽生产过程中是MRTX849溶解度否参与了应激导致家禽免疫器官损伤引起的炎症反应,进而影响机体的免疫功能,值得进一步研究。海藻硫酸多糖(Sulfated Polysaccharides from Seaweed,SPS)具有良好的抗炎、抗病毒、抗肿瘤活性和调节机体免疫力的功能。目前,关于SPS作为一种天然的免疫调节剂应用于家禽领域中的研究较少。探究SPS调控家禽免疫器官炎症反应的作用机理对家禽生产具有重要的指导意义。本研究通过构建雏鸡断喙应激炎症模型和鸡巨噬细胞(HD11)炎症模型,采用ELISA、CCK-8、LDH、q RT-PCR、Ed U、流式细胞术等方法在个体和细胞水平上检测SPS对雏鸡脾脏中MyD88基因和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中相关基因表达以及HD11细胞增殖、凋亡的影响。探讨SPS调控家禽脾脏应激性炎症反应的作用机理,为新型抗应激添加剂的开发和应用提供理论依据。主要研究内容和结果如下:试验一:SPS对断喙应激诱导雏鸡脾脏炎症反应的影响选择1日龄体重相近、健康的固始公鸡200只,随机分为A、B、C、D、E 5个组。A组为对照组,饲喂基础日粮不添加SPS;B、C、D、E组为断喙应激组,基础日粮中分别添加0 mg/kg,80 mg/kg,160 mg/kg,240 mg/kg的SPS。适应性饲养至10日龄,分别于断喙后第1、3、5、7 d后进行屠宰和样品采集。采用全自动血液生化分析仪、ELISA和q RT-PCR检测免疫相关指标的变化。结果显示,与A组相比,B组雏鸡在断喙后不同时间点,血清中CORT、LDH、TC、IL-6、TNF-α、IL-1β和NF-κB的含量显著升高(P<0.05),Ig M、Ig G、CD3和CD4的含量显著降低(P<0.05),表明雏鸡断喙应激炎症模型构建成功;与A组相比,B组脾脏组织中MyD88基因表达量显著升高(P<0.05);与B组相比,不同浓度的SPS均能提高雏鸡的免疫器官指数,降低血清中炎性细胞因子的含量,下调脾脏中MyD88和促炎基因的相对表达量,缓解断喙应激引起的炎症反应,改善机体的免疫状态。其中,添加160 mg/kg SPS的效果最显著(P<0.05)。试验二:MyD88对HD11细胞免疫功能的影响在雏鸡断喙应激诱导的炎症模型中,MyD88基因在脾脏中显著高表达,推测MyD88基因在调控应激诱导的鸡脾脏selleckchem Torin 1炎症反应中可能发挥关键作用。因此,我们通过构建MyD88过表达载体和干扰片段并将其转染至HD11细胞中,旨在从细胞水平上探究MyD88基因对HD11细胞免疫功能的影响。结果显示,MyD88过表达后能显著Immunochromatographic assay上调促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-8、NF-κB和TLR4基因的相对表达量(P<0.05),显著抑制HD11细胞的活性和增殖(P<0.05),促进细胞的凋亡(P<0.05);干扰结果与过表达结果呈相反趋势。此结果表明,MyD88基因具有促炎作用,促进炎症相关基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,调节HD11细胞的免疫功能。试验三:SPS对脂多糖(LPS)诱导HD11细胞炎症反应的影响通过添加LPS构建HD11细胞促炎模型。采用CCK-8和LDH法筛选SPS在HD11中的最佳添加浓度,并通过转染MyD88过表达质粒和干扰片段与LPS共处理,以及将SPS与LPS进行共处理,采用q RT-PCR法检测炎性细胞因子的表达水平,探究SPS是否通过MyD88基因调控HD11细胞的炎症反应。结果显示,添加2μg/m L的LPS刺激细胞9 h成功构建HD11细胞促炎模型,50μg/m L SPS能显著提高HD11细胞的存活率(P<0.05),且对细胞没有明显的毒性作用;MyD88与LPS联用具有协同作用,能进一步促进IL-1β、TNF-α、IL-8、NF-κB和TLR4等炎症基因的表达(P<0.05),加剧由LPS诱导的细胞炎症反应;SPS与LPS进行共处理,能显著下调TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路中相关基因的表达水平(P<0.05),缓解由LPS刺激的细胞炎症反应。综上所述,SPS可能通过下调MyD88基因所介导的TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路,缓解雏鸡断喙应激诱导的炎症反应,以及LPS所致HD11细胞炎症反应。