盐酸小檗碱具有良好的抗炎活性,但口服吸收差,注射给药会引起严重的副作用。脂质体等纳米递送系统可靶向递送药物,若选择合适的靶向配体与盐酸小檗碱脂质体偶联,可以实现靶向递送,达到减少毒性,提高抗炎效果的作用。由于炎症部位的血管内皮细胞会高表达P-选择素,低分子量岩藻多糖对P-选择素有良好的结合能力,将盐酸小檗碱包进脂质体中,再用低分子量岩藻多糖修饰脂质体,使脂质体能特异性的与能表达P-选择素的活化血管内皮细胞结合,可以实现盐酸小檗碱的炎症靶向递送。本研究鉴于P-选择素与岩藻多糖的特异性结合,拟制备低分子concomitant pathology量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体,并对其被摄取量、摄取方式、全身分布以及抗炎作用展开研究,评价盐酸小檗碱炎症靶向递送作用。本研究主要内容如下。1.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的制备低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的制备主要包括:盐酸小檗碱含量测定方法的建立、盐酸小檗碱脂质体包封率方法的建立、盐酸小檗碱脂质体处方优化、脂质体的表征。结果显示:(1)高效液相色谱法检测盐酸小檗碱含量在浓度范围为0.25-50μg/m L时,线性关系良好,回归曲线方程为Y=33.34X–7.939,R~2=0.9994,并且稳定性符合标准;(2)采用葡聚糖凝胶柱法分离盐酸小檗碱脂质体与未包封的盐酸小檗碱,两者出峰间隔为3 min,且回收率符合标准,此方法适合盐酸小檗碱脂质体的分离,进而可以计算包封率;(3)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的最佳处方与工艺:磷脂浓度10 mg/m L、磷脂胆固醇比1:1、磷脂药物比35:1、水化p H=6.0。制备过程:将膜材按照比例溶解在10 m L氯仿中,40℃旋转蒸发彻底除去溶剂,随后加入10 m L p H=6.0的PBS溶液,水化30 min,将洗下的膜材在冰水浴的条件下,用探头超声条件为400 W超声2 s,间隔2 s,超声10 min,得到的脂质体经0.22μm微孔滤膜过滤后,用脂质体挤出器将脂质体反复挤出通过100 nm的聚碳酸酯膜,然后使用Na OH调节脂质体外水相p H到7,加入低分子量岩藻多糖,室温反应过夜,最终得到黄色半透明低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体;(4)最优处方制备的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体粒径为1selleck Dibutyryl-cAMP04.13±1.18 nm,Zeta电位为-12.2±0.46 m V,包封率为79.73±1.06%,载药量为0.45±0.01%,符合纳米制剂要求。2.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体体外靶向人脐静脉血管内皮细胞的作用研究用LPS激活人脐静脉血管内皮细胞,评价低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的细胞毒性、被摄取量、被摄取方式以及抗炎效果。结果显示:(1)≤80μg/m L低分子量岩藻多糖偶联的盐INCB28060核磁酸小檗碱脂质体对活化的人脐静脉血管内皮细胞活性无显著影响(P>0.05);(2)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体被活化的人脐静脉血管内皮细胞摄取量是未修饰的盐酸小檗碱脂质体的1.5倍;(3)活化的人脐静脉血管内皮细胞摄取低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的方式主要通过小窝蛋白和网格蛋白介导的内吞作用,且需要能量;(4)以盐酸小檗碱计,10μg/m L低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能显著(P<0.01)抑制活化的人脐静脉血管内皮细胞产生IL-1β和IL-6。以上结果表明,以盐酸小檗碱计,低于80μg/m L的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对活化的血管内皮细胞无明显细胞毒性,10μg/m L的低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体具有良好的抗炎能力,效果优于同浓度的游离盐酸小檗碱或未被修饰的盐酸小檗碱脂质体,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能与P-选择素结合,然后被活化的人脐静脉血管内皮细胞主动摄取,具有炎症靶向潜力。3.低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体体内炎症靶向作用研究研究了低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体在大鼠足肿胀模型中,在炎症部位与各个脏器中分布、体内抗炎效果以及组织病理变化影响。结果显示:(1)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体在肿胀的右足中的浓度高于未修饰的盐酸小檗碱的浓度,也高于其在无炎症的左足中的浓度,而低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体与未修饰的脂质体在各脏器中分布无显著差别;(2)低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能显著缓解(P<0.01)大鼠足肿胀模型中血浆中白细胞计数及单核细胞计数升高,IL-1β与IL-6显著升高,足趾重量增加等趋势;(3)3 mg/kg的游离盐酸小檗碱或盐酸小檗碱脂质体尾静脉注射给药7 d后,大鼠心脏出现少量炎性细胞浸润,肝脏出现局部坏死,肝细胞发生脂肪变性,而注射相同浓度低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体的大鼠各脏器无明显病变。以上结果表明,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体对大鼠足肿胀炎症模型与未修饰的脂质体或游离盐酸小檗碱相比,能提高抗炎效果,具有靶向作用。综上所述,本研究制备了低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体,获得了最优处方和制备工艺,其包封率为79.73±1.06%,载药量为0.45±0.01%,符合纳米制剂要求。在体外,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体能通过与血管内皮细胞上P-选择素特异性结合并被内吞,提高了摄取量、逃避溶酶体降解;在体内,低分子量岩藻多糖偶联的盐酸小檗碱脂质体通过靶向炎症部位血管内皮细胞提高炎症部位药物浓度,降低非炎症部位脏器浓度,最终提高盐酸小檗碱抗炎效果,发挥炎症靶向作用。