【目的】研究新生鼠缺血缺氧性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后星形胶质细胞中S100B/RAGE信号相关蛋白(S100B、s RAGE、RAGE)、Smad 3蛋白以及不同表型反应性星形胶质细胞(A1和A2型)和炎性因子、营养因子的表达变化,研究S100B/RAGE与Smad 3之间的调节关系,探讨天麻素通过S100B/RAGE-Smad 3信号在缺血缺氧性脑损伤中的保护作用机制,为新生儿缺血缺氧性脑损伤的防治提供新的思路。【方法】本研究采用新生10 d C57BL/6J小鼠和体外培养的TNC-1星形胶质细胞,通过体内复制HIBD模型和体外氧糖剥夺模型(oxygen glucose deprivation,OGD)诱导TNC-1星形胶质细胞进行实验。第一部分:86只小鼠随机分为三组:假手术组(Sham)、HIBD模型组(HIBD)、HIBD+天麻素(100 mg/kg)组(HIBD+GAS)。通过Zea-Longa评分、抓握实验和负向趋地实验检测神经功能缺损;ELISA检测各实验组脑组织匀浆和血浆中S100B和s RAGE的蛋白表达;采用Western blot和免疫荧光双标染色检测各实验组星形胶质细胞RAGE、C3、S100A10、TNF-α、BDNF、Smad 3、p-Smad 3的表达,研究HIBD后S100B/RAGE-Smad 3相关蛋白在星形胶质上的表达及天麻素对其的影响。第二部分:将TNC-1细胞分为对照组(Control)、氧糖剥夺组(OGD)、氧糖剥夺+天麻素(0.34 m M)干预组(OGD+GAS)、天麻素单独干预组(GAS)。采用Western blot和免疫荧光双标染色检测各实验组TNC-1细胞RAGE、C3、S100A10、TNF-α、BDNF、p-Smad 3的表达,研究OGD刺激对RAGE信号、不同表型反应性星形胶质细胞和炎症相关蛋白的影响。第三部分:将TNC-1细胞分为六组:对照组(Control)、氧糖剥夺组(OGD)、氧糖剥夺+FPS-ZM1(100 n M)干预组(OGD+FPS-ZM1)、氧糖剥夺+天麻素(0.34 m M)干预组(OGD+GAS)、氧糖剥夺+天麻素+FPS-ZM1干预组(OGD+GAS+FPS-ZM1)。采用Western blot检测各实验组、p-Smad 3/Smad 3、TNF-α、BDNF、C3、S100A10的表达,研究RAGE信号对Smad 3蛋白和不同表型反应性星形胶质细胞的作用及天麻素干预对其的影响。【结果】第一部分,(1)通过TTC染色和行为学实验结果显示:与Sham组相比,HIBD组出现明显梗死病灶,小鼠Zea-Longa评分升高(P<0.05),抓握实验评分降低、负向趋地实验时间延长(P<0.05);天麻素治疗后梗死病灶面积减少,Zea-Longa评分显著降低(P<0.05),抓握实验评分升高、负向趋地实验时间缩短(P<0.05)。(2)ELISA结果显示:在脑组织匀浆中HIBD组S100B和s RAGE含量较Sham组明显升高(P<0.05),天麻素治疗后均显著降低(P<0.05);在血清中HIBD组S100B含量明显升高(P<0.05),天麻素治疗后S100B显著降低,而s RAGE含量较HIBD组进一步升高(P<0.05)。(3)Western-blot和免疫荧光双标染色显示:小鼠HIBD后星形胶质细胞激活,RAGE、C3、S100A10、TNF-α、BDNF表达较Sham组显著升高(P<0.05),Smad 3磷酸化程度升高(P<0.05);天麻素治疗后RAGE、CYouth psychopathology3、TNF-α表达显著降低(P<0.05),S100A10、BDNF表达显著升高(P<0.05),Smad 3磷酸化Baricitinib体内实验剂量程度下降(P<0.05)。第二部分,Western-blot和免疫荧光双标染色显示:在OGD激活的星形胶质细胞中RAGE、p-Smad 3、C3、S100A10表达较Control组显著升高(P<0.05);天麻素干预后RAGE、p-Smad 3、C3表达显著降低(P<0.05),而S100A10表达显著升高(P<0.05)。第三部分,Western-blot显示:FPS-ZM1阻断RAGE信号后,抑制OGD诱导的TNN2211研究购买NC-1星形胶质细胞Smad 3的激活,抑制TNF-α、C3和S100A10(P<0.05),促进BDNF的表达;而FPS-ZM1阻断剂与天麻素联合应用(OGD+GAS+FPS-ZM1组)较OGD+FPS-ZM1组进一步抑制C3的表达(P<0.05),但TNF-α、BDNF、S100A10的表达无显著差异(P>0.05)。【结论】(1)新生鼠HIBD后胼胝体区反应性星形胶质细胞S100B/RAGE和Smad 3信号被激活,炎症因子TNF-α和神经营养因子BDNF表达升高。(2)S100B/RAGE可调节激活的星形胶质细胞中Smad 3信号及炎性因子和营养因子的表达。(3)天麻素通过抑制S100B/RAGE-Smad 3信号,抑制A1型反应性星形胶质细胞和TNF-α的表达、促进A2型反应性星形胶质细胞和BDNF的表达,改善神经功能损伤。