大口黑鲈(Micropterus Salmoides)是我国重要的淡水经济养殖鱼类,养殖产量超60万吨/年。近年来,养殖大口黑鲈疾病频发,特别是大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV),对大口黑鲈养殖业造成了巨大的经济损失。为明晰大口黑鲈弹状病毒的致病机制,制定MSRV有效防控措施,本研究通过活体感染、转录组测序等手段证明MSRV感染诱发NF-κB、MAPK和PI3K通路介导的炎症反应,并基于炎症通路筛选有效抵抗MSRV感染的广谱抗病毒药物,为大口黑鲈弹状病毒病的防控提供新的思路。具体研究结果如下:1.MSRV感染通过NF-κB、MAPK和PI3K信号通路介导炎症反应。活体感染和细胞水平实验证明,MSRV诱发炎症反应产生,促进TNFα、selleck HPLCIL-8、IL-1β、COX-2、IFN-γ和抑炎因子IL-10的表达。转录组测序提示炎症产生信号通路。抑制剂实验结果表明,当MAPK(包括p38 MAPK、ERK、JNK)信号通路被抑制时,IL-10和IFN-γ的表达受到显著抑制,而促炎因子的表达没有受到显著影响,说明MAPK仅参与调控MSRV感染引发的炎症反应中IL-10和IFN-γ的表达。当NF-κB通路被抑制时,TNFα、IL-8、IL-1β、COX-2、IL-10和IFN-γ的表达均受到显著抑制,NF-κB p65亚基入核也受到显著抑制,表明NF-κB信号通路参与MSRV感染诱发炎症反应的过程。当PI3K通路被抑制Pidnarulex采购时,TNFα、IL-8、IL-1β、COX-2、IL-10和IFN-γ的表达及AKT的入核也受到显著抑制,表明PI3K信号通路参与MSRV感染诱发炎症反应的过程。2.杨梅素调节NF-κB p65信号发挥抗炎和抗病毒活性。评价靶向炎症通路的抗病毒策略,筛选广谱抗病毒药物。具体结果如下:杨梅素、柚皮素、穿心莲内酯和白藜芦醇显著抑制NF-κB启动子活性。MSRV G转录水平的定量分析和空斑实验结果表明杨梅素有较好的抗病毒活性。同时,杨梅素能够缓解MSRV感染引发的CPE,并抑制相关炎症因子的过度表达。Western blot及灰度分析结果显示,杨梅素的处理能够显著抑制NF-κB p65亚基的磷酸化和入核。综上,杨梅素可通过调控NF-κB信号来发挥其抗炎、抗病毒活性。3.杨梅素直接抗MSRV活性。为进一步optical pathology探究杨梅素最佳用药方式,分别设置预处理、共孵育和治疗实验组,结果表明杨梅素均能抑制MSRV的复制,并能显著抑制MSRV感染引起的CPE,其中共孵育处理下抗病毒效果最好。进一步检测杨梅素对MSRV吸附的影响,结果显示杨梅素在100μM浓度孵育下可以显著抑制MSRV的吸附,具有直接抑制MSRV活性。