海鲜产品因其独特的风味以及丰富的营养成分,受到消费者青睐,然而海鲜产品极容易受到微生物的影响从而导GSK1120212采购致生化降解而变质,此外,消费者对高质量的海鲜的需求日益增加,尤其是三文鱼这类生鲜食品,直接食用极容易受到细菌以及其他危害因子的感染,从而对身体造成不良影响。基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)因其简单性,高通量等优点,已被广泛应用于真菌和细菌的鉴定。本论文运用MALDI-TOF-MS技术和免疫磁分离技术相结合,实现了在法国银鳕鱼中对细菌的捕获,对细菌的检测更加简单,快速和便捷。本文以大肠杆菌为模型菌,大肠杆菌特异性抗体被偶联到功能化磁珠(MBs)上,并在离心管中对鱼肌浆蛋白(FSP)和鱼肌肉蛋白液中ABT-199大肠杆菌进行捕获。探讨了不同的基质(CHCA和SA)对细菌检测的影响,结果发现CHCA基质更有利于该细菌的鉴定。通过对比三次从法国银鳕鱼肌浆蛋白液中对大肠杆菌的捕获,对3个独立实验所得质谱进行平均分析,发现其平均相似度为0.95±0.03,表明本方法具有良好的重现性。在样品中添加金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌作为干扰物,验证了在复杂的细菌环境中,特异性抗体的能准确捕获目标菌、以及对其他细菌不也会产生反应。成功对鱼肌表面的细菌进行检测,证明了对肉类样品表面细菌检测的可能性。通过对比从不同复杂环境中抓捕的大肠杆菌,利用偏最小二乘法(PLS-DA)分析,发现了十个生物标志物离子,为后续的大肠杆菌研究提供了基础。成功的开发了一种简单、快速和通用的用于细菌快速检测的磁辅助微流控方法。使用Ig G抗体与磁珠进行偶联后,将偶联好的磁珠固定在微流控通道表面,对通入的细菌进行捕获检测。比较了微流控通道表面在用BSA封闭前后对细菌抓捕的影响,实验表明是用微流控通道前需要进行封闭处理,并且发现通道经过封闭一次后,未来五次实验均可对细菌进行成功捕获。设计了两种微流控通道,“Z”字型通道和简单直通道,通过对比最后选择了“Z”字型通道。证明了“Z”字型通道中细菌捕获具有良好的重现性。因在微流控通道中对细菌进行捕获,设计了四种流速(0μL/min、1μL/min、5μL/min和10μL/min)对其捕获的影响,发现低速时细菌捕获更有利。为了测试该方法的检测限,将一系列浓度梯度的细菌悬浮液通入微流控通道中,发现检出范围为6.0-6.0×10~4 CFU/m L,最低检测限为6 CFUspecialized lipid mediators/m L。最后研究了该方法对不同细菌的捕获,发现能从5μL鱼肌浆蛋白样品中对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌,证明了该方法不具有特异性,可对多种细菌进行检测。利用大肠杆菌特异性抗体偶联的磁珠对实际样品中的细菌进行监测,如矿泉水和自来水中,以及不同冷冻鱼肌肉表面的细菌进行了检测,对所开发的方法进行了验证。利用Ig G抗体偶联的磁珠对新鲜的样品进行了分析,研究其储存过程中细菌的变化,验证了该方法可对未知样本中的细菌进检测。综上所示,本文通过在大溶液中和微流控通道中对鱼肌浆蛋白液中的细菌检测,运用了两种抗体(anyi-E.coli和Ig G)对磁珠进行功能化,从而达到细菌捕获的目的。研究了大溶液中和微流控通道中的重现性,稳定性和检测限,以及在实际样品中的应用价值。