研究目的近几年来,恶性肿瘤的发病率持续增高,是威胁人类身体健康的常见疾病之一。治疗恶性肿瘤的主要手段仍是化疗,而化疗导致的血小板减少症其发病率较高,特别是卡铂化疗引起的血小板减少发生率高达81.8%~([1]),对恶性肿瘤患者继续治疗和生活质量均具有限制性作用。目前,已批准用于肿瘤化疗所致血小板减少症(Chemotherapy induced thrombocytopenia CIT)的药物品种较少,且生物药物、化学药物、中成药各有不足。生物药输注血小板疗效稳定,但不良反应较多且价格昂贵;化学药物中我国能用的比较少,根据我国药品监督管理局批准用于治疗CIT的药物有重组人血小板生成素(rh TPO)和重组人白细胞介素-11(rh IL-11),但是美国FDA只批准rh IL-11用于治疗化疗所致血小板减少症,所以我国现在临床应用较多仍是rh IL-11,且作用强度和起效时间较差;中成药中并未有专门针对恶性肿瘤患者化疗所致血小板减少症“脾肾阳虚,血瘀血虚”病机的药。因此,目前临床迫切需求更为安全、有效、经济的化疗所致血小板减少症的药物。本研究是导师及其团队在多年从事中医药防治恶性Dolutegravir核磁肿瘤临床工作中,逐渐整理、总结、筛Psychosocial oncology选出的针对化疗所致血小板减少症的有效经验方,经临床验证安全、有效的“四仙方”~([2])为基础,开发具有温肾健脾,活血生血功效,用于治疗化疗引起血小板减少症的医疗机构中药制剂——“四仙颗粒”,弥补当前治疗化疗所致血小板减少症药物的不足,满足临床对安全、有效、经济的治疗化疗所致血小板减少症的中药制剂的迫切需求。同时又能够发挥中医药改善恶性肿瘤治疗毒副反应、支持化疗治疗、提升患者生活质量的优势,符合临床需求。本研究通过动物实验,由外周血到造血系来阐述四仙方“温肾健脾,活血生血”功能对化疗所致血小板减少症的机理。研究方法根据四仙方药物功效将四仙方进行拆方,温肾健脾组由仙茅、淫羊藿、灵芝、茯苓、黄芪、大枣组成,提取制成0.4 g生药/m L药液。将120只SPF级KM小鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、rh IL-11组(250μg/kg)、四仙方组(20 g/kg)、温肾健脾组(12 g/kg)和活血生血组(8 g/kg)。自试验第1天开始,正常对照组、模型组分别灌胃蒸馏水,四仙方组、温肾健脾组和活血生血组分别灌胃相应药物,灌胃给药体积均为20 m L/kg;rh IL-11组皮下注射重组人白介素-11溶液,注射给药按体积为10 m L/kg。每天1次,连续给药14天。在给药第8天后,除正常对照组以外,其他各组小鼠均采取尾静脉注射卡铂溶液,配制浓度为5 mg/m L,注射体积按体重0.15 m L/10g,以建立化疗致血小板减少小鼠模型。正常对照组的小鼠按相同给药方法给药,体积相同,将生理盐水从尾静脉注注入。在实验第14天末次给药40 min后,用动物血细胞分析仪测定采集的小鼠眼眶静脉血中血小板数量;小鼠采取脱颈椎处死的方法,右侧股骨小心分离出来,用6号针吸取1m LRPMI1640培养液对骨髓腔进行反复冲洗,经洗涤和染色后上BD C6流式细胞仪检测CD34~+和CD41~+CD61~+阳性细胞比例,分离左侧股骨,置于10%甲醛固定24 h。脱钙后用石蜡包埋,并切成约5μm厚切片。再用苏木精和伊红(H&E)染色,显微镜下拍照分析巨核细胞数量。研究结果四仙方及其拆方对化疗所致血小板减少症小鼠外周血血小板计数用SPSS22软件对实验数据进行统计后,与正常对照组比较,模型组小鼠血小板数量显著降低(p<0.01),表明造模成功;与模型组相比,各给药组血小板数量均较模型组升高(p<0.01,p<0.05),其中四仙方组血小板计数(1048±230)×10~9/L最高。四仙方及其拆方对化疗所致血小板减少症小鼠骨髓CD34~+细胞表达率结果显示与正常对照组比较,模型组小鼠骨髓细胞中CD34~+细胞比例显著减少(p<0.01);与模型组相比,各给药组CD34~+细胞比例均较模型组升高(p<0.01,p<0.05)。其中四仙方组小鼠骨髓细胞CD34~+表达率(0.35±0.17)%为最明显组。四仙方及其拆方对化疗所致血小板减少症小鼠骨髓细胞CD41~+CD61~+表达率结果显示与正常对照组比较,模型组小鼠骨髓细胞中CD41~+CD61~+细胞比例显著减少(p<0.01);与模型组相比,各给药组血小板数量均较模型组升高,其中四仙方组数据亦是最好,统计学意义明确。四仙方及其拆方对化疗所致血小板减少症小鼠股骨巨核细胞数量的检测,与正常对照组比较,模型组小鼠骨髓中巨核细胞数量显著减少(p<0.01);与模型组相比,各给药组血小板数量均较模型组升高(p<0.01,p<0PF-6463922体内实验剂量.05)。研究结论卡铂注射液给KM小鼠进行造模,试验结果进行数据统计,与正常对照组比较,模型组小鼠血小板数量显著降低(p<0.01),表明造模成功,可以用以研究化疗所致血小板减少症。四仙方组对化疗所致血小板减少症小鼠外周血细胞计数、小鼠骨髓CD34~+细胞表达率、小鼠骨髓细胞CD41~+CD61~+表达率及鼠股骨巨核细胞数量的检测均取得了不错的效果。温肾健脾组各组数据均略低于四仙方组,与rh IL-11组相当,说明我们治疗化疗所致血小板减少症是重要的治疗原则。综上所述,四仙方“温肾健脾,活血生血”功能对化疗所致血小板减少症的疗效明确,其组方科学合理,值得广泛推广用于临床。